一、基础耗材与培养设置

采用标准透明平底96孔微孔板进行液体深层静置培养，不使用半固体琼脂培养基，配制目标液体培养基（如RPMI 1640等真菌药敏培养基），统一接种孢子悬液，控制初始接种浓度一致，减少初始差异。

采用适配封板膜（透气厌氧封板/防蒸发封板膜）做封板处理，减少长周期培养边缘蒸发、冷凝与氧气波动；整体放置于稳定外部恒温培养箱，保持恒定温湿度，减少温度扰动，全程静置培养避免剧烈振荡造成菌丝断裂和成像模糊。

提前做全板空白基线扫描校正，扣除纯培养基背景信号，消除有色培养基底色干扰。

二、oCelloScope扫描参数设置

开启FluidScope多层Z轴倾斜扫描模式，设置足够Z轴层数进行全深度立体扫描，覆盖底层沉降菌丝团和上层菌丝结构，避免仅单一焦平面采样导致定量偏差。

设置合适扫描间隔（数小时/次，适配真菌萌发周期），进行7~14天延时连续成像采集，保存带时间戳的全时序图像；全程保持扫描时段暂停外部振荡，保证对焦稳定成像清晰。

三、UniExplorer算法定量方案

1. BCA背景校正算法：用于整体全孔总生物量定量，计算整体等效生长曲线、延滞期λ、比生长速率μ、AUC参数，表征整体菌丝总生长量动态变化，完成群体水平动力学定量。

2. SESA图像分割算法：进行单细胞/微菌落/菌丝骨架分割，自动计算骨架长度、分枝点数、分枝密度、圆度、延伸率、菌丝总面积、颗粒度等20余项形态参数，定量菌丝延伸速率、分枝发育模式、丝状化程度、异质性微菌落生长差异，追踪菌丝形态动态演化。

3. TA总吸收算法可做辅助对照，同步导出csv动力学数据与时序原始图片，保证数据可追溯。

高密度融合菌丝区域可适当调整分割阈值、背景校正参数，减少粘连菌丝带来的单细胞分割误差；重点分析整体总量参数与形态群体参数，而非单根菌丝精细计数。

四、对照校正与验证方案

设置同步空白对照孔、复孔以及阳性/药物对照孔，消除边缘蒸发、温湿度漂移造成的基线误差；必要时以终点干重法、荧光染色或CFU计数做交叉验证，建立成像参数和真实菌丝生物量的对应关系。

可生成时序视频用于论文可视化证据，同时保存原始图像与参数文件，满足SCI可溯源数据要求。

五、数据后处理与统计

用Origin、R等软件做动力学曲线拟合、参数统计及相关性分析，区分菌丝整体生长动力学和微观形态发育动力学；重点分析菌丝生长速率、分枝发育模式、抗真菌药物诱导的形态异常变化，解析液体深层培养真菌异质性生长机制。