第一步：配制培养基

根据菌株类型选择对应培养基（如RPMI 1640、LB、SDB等），按照配方称量干粉，加入纯水溶解，调节pH值，进行高压蒸汽灭菌处理。

灭菌后冷却至适宜温度，按需添加药物、血清或其他添加剂，充分混匀；预留空白培养基用于对照孔和边缘缓冲孔，提前预热至目标培养温度，减少后续温差结露与基线漂移。

准备标准透明平底96孔微孔板，确认板底透光完好、无划痕。

第二步：菌株接种与板内排布

1. 制备菌悬液：活化传代菌株，通过比浊法（麦氏比浊/分光光度法）校准初始接种浓度，稀释至目标起始浓度，保证整板初始菌量一致。

2. 微孔板加样：采用排枪均匀加样，设置合适体积（常规100μL/孔，长周期真菌实验150~200μL/孔）；最外圈孔填充无菌培养基做边缘缓冲孔，正式实验组布板于中心区域，同时设置纯培养基空白对照孔、阳性对照孔。

3. 封板处理：选用适配透气/半透气封板膜平整封板，兼顾气体交换和防蒸发需求；瞬时离心去除孔内气泡，保证孔底液体均匀，减少成像干扰。

第三步：放置仪器与基础环境设置

将oCelloScope主机整体放入恒温培养箱/厌氧工作站内，固定好微孔板至仪器板架，确认板体水平卡紧，关闭仪器外盖；设置培养箱温度、湿度、气体环境（有氧/厌氧）并保持稳定，远离冷风口和频繁开门区域，减少温度湿度波动。

检查光路窗口洁净度，确认无污渍、水汽，保证FluidScope Z轴扫描光路正常对焦。

第四步：UniExplorer软件上机参数设置

1. 新建实验任务：打开UniExplorer软件，新建job任务并命名，选定对应oCelloScope设备，选择96孔板布局模板，完成板位映射设置。

2. 扫描参数配置：开启FluidScope倾斜Z轴多层扫描模式，设置Z轴层数与扫描深度，覆盖全孔液体深度；设定扫描间隔（细菌可30分钟左右，真菌可1~2小时）、总监测时长、曝光参数，开启自动对焦功能。

3. 算法与基线校正：选择BCA背景校正算法、SESA形态分析算法，执行初始全板基线扫描校正；标记空白对照孔、异常孔位，设置曲线平滑参数，开启实时动力学分析模块。

4. 启动采集：确认参数无误后开始延时自动扫描成像，全程避免外部剧烈振荡，如需间歇振荡则设置时序程序，在扫描时段暂停振荡；可远程实时查看成像和生长曲线。

第五步：实验结束与数据处理导出

1. 结束采集：达到预设时长后停止扫描，保存完整原始时序图像堆栈和项目文件；取出微孔板并按生物安全规范处理。

2. 数据预处理：执行基线校正、批量剔除异常孔、曲线平滑处理，查看整体动力学曲线与单细胞形态参数，确认数据质量。

3. 数据导出：导出等效OD动力学参数、生长参数（λ、μ、AUC）、20余项形态学参数，保存为csv/Excel格式；导出时序图片、延时视频、原始图像堆栈，用于论文可视化与溯源；可进一步用第三方软件（Origin、R等）做统计分析与绘图。

4. 仪器收尾：关闭软件与仪器电源，做好光路清洁和防尘处理，记录实验参数与维护日志。