一、微孔板封板与布板基础设置

1. 封板膜选型

好氧/兼性菌株长周期培养：选用半透气防蒸发光学封板膜，平整无褶皱贴合板口，兼顾基础气体交换、大幅减少水分蒸发和板盖冷凝；避免普通高透气膜造成快速干孔，避免全不透气膜导致好氧菌缺氧代谢异常。

严格厌氧菌培养：在厌氧工作站内整体密闭环境，搭配低透气/密封光学封板膜，阻挡外界氧气渗入，维持孔内厌氧微环境。

全程一次性封板膜，不可复用；封板前擦干板口边缘液体，保证密封贴合；瞬时低速离心去除孔内气泡，消除液面不均匀干扰成像。

2. 加液与布板

加液量：长周期监测选用150μL/孔，保障营养储备、延缓整体蒸发；最外圈整圈孔填充纯无菌培养基做蒸发缓冲牺牲孔，正式实验组仅使用中心孔位。

接种浓度：提前校准菌液OD/孢子浓度，避免过高浓度造成菌丝提前融合、过低浓度信噪比不足；整板统一加样保证初始基线一致。

预处理：微孔板和培养基提前预热至培养温度，减少温差结露问题。

二、仪器硬件密闭放置设置

1. 板架固定：微孔板平稳卡入oCelloScope板架，确认完全卡紧、保持全程水平，关闭仪器原厂外盖，形成第一层物理防护；整机整体放入恒温培养箱/厌氧工作站内，全程不再开盖、不取出板体。

放置位置：远离培养箱冷风口、顶部冷凝区、箱门开合区域，减少温度波动与箱体冷凝水滴落风险；保持箱体均温恒湿环境，必要时增设加湿水盘维持稳定湿度。

厌氧场景：整机全程置于厌氧工作站内，保持整体无氧密闭环境，不反复移出；线缆走线固定、不干扰箱体风道。

2. 光路维护：上机前检查光路窗口洁净度，用光学擦镜纸+无水乙醇规范清洁，确认无污渍水汽；全程保持防尘防护，不中途擦拭光路，避免干扰扫描基线。

三、UniExplorer软件参数设置

1. 扫描模式：启用FluidScope Z轴全深度多层堆叠扫描，匹配液体深度设置Z轴层数，保障底层贴壁菌丝完整成像；设置适配扫描间隔（真菌长周期10~30min，细菌可5min），兼顾数据精度与减少反复扫描震动干扰静置生长。

开启初始全板BCA基线校正，启用SESA形态分割算法、曲线平滑；提前标记异常孔位，设置批量剔除模板，消除静态结晶/沉淀基线漂移；全程错峰振荡（如有间歇振荡），扫描时段保持静置。

建立远程监控模式，通过软件远程查看曲线、导出数据，无需物理开盖干预；保存完整原始图像堆栈与工程文件，保障溯源；设定总监测时长，一次性启动全周期延时扫描。

2. 基线质控：开启动态基线校正，长期追踪基线稳定性，监测缓慢蒸发漂移；全程不改动基础扫描模板与Z轴参数。

四、环境与污染防控设置

1. 培养环境：保持培养箱恒温恒湿，减少昼夜温差波动，抑制板盖结露；定期监控箱体湿度，避免过度高湿造成冷凝或湿度过低加速孔内水分流失；做好箱体无菌维护，防止长周期污染。

2. 无菌保障：全程无菌配液与接种，培养基充分灭菌/过滤除菌，减少长周期杂菌污染；不中途开盖加药/补液，如需梯度药物实验提前一次性完成布板给药。

3. 防挥发质控：通过缓冲孔+半透气封板膜双重保湿方案，降低孔间渗透压差异；设置空白对照孔用于基线校正与漂移验证。

五、数据复核与后续处理

1. 监测过程：远程查看动力学曲线与延时图像，确认无异常基线漂移、冷凝干扰、结晶假阳性信号；复核复孔参数重复性。

2. 实验结束：一次性导出全部时序数据、动力学参数、形态参数；完成参数拟合与统计分析；按生物安全规范统一处理整块微孔板，不再拆分复用。

3. 参数记录：完整记录Z轴参数、扫描间隔、封板类型、培养温湿度、基线校正模板，保证可复现性。

六、关键禁忌事项

1. 严禁中途打开封板膜、取出微孔板、反复开关仪器盖板，破坏密闭微环境、引入氧气/污染/冷凝干扰。

2. 避免长时间超高频率扫描造成震动干扰贴壁生物膜/菌丝结构；避免过度全密闭造成好氧菌缺氧、代谢酸化。

3. 高密度真菌长周期实验需确认SESA分割参数，避免融合菌丝导致形态参数偏差。