一 断电后能否续接监测的判定标准
1 硬件层面判定条件
断电时间短,微孔板全程留在恒温培养箱内部,箱体具备断电保温缓冲层,箱内温度波动幅度≤±0.5℃,无大幅升温、降温,菌体/丝状真菌生长节奏未出现明显断层,可直接续接扫描,无需重新培养。
断电时间超过60分钟,培养箱无保温功能,箱内温度偏离目标温度超过1℃,液体培养基出现温差应激、菌丝发生异常应激生长,仅能续接采集图像,但生长动力学数据会存在明显断层,需要在数据中标记断电时段,不建议直接合并拟合完整生长曲线。
断电期间微孔板被取出、移动、开盖擦拭、更换封板膜,菌体分布、液面状态发生改变,成像基线、菌丝原始分布被破坏,无法无缝续接定量监测,建议重新开展实验。
2 软件与仪器文件判定条件
断电前UniExplorer工程文件、本地图像堆栈完整保存在电脑硬盘,未存在文件损坏、时序中断标记,仪器扫描位置记忆正常,板架定位无偏移,支持断电恢复后接续时序扫描。
断电过程中电脑硬盘异常断电,图像缓存、工程临时文件丢失,时序序列断裂,无法自动接续原有时间轴,只能手动分段采集后续图像,不能连贯拟合整条生长曲线。
3 菌株类型区分判定
细菌短周期监测(24h内):短时间断电(30分钟内)温度波动小,可正常续接监测,生长偏差可忽略。
丝状真菌长周期液体培养(7天及以上):菌丝生长周期长,短时间断电带来的生长误差占比低,仅需标记断电时间点;断电超过2小时,菌丝分枝、延伸速率出现阶段性异常,动力学参数存在系统误差。
二 断电后续接监测完整操作流程
1 供电恢复前期设备检查
确认仪器主机、电脑、恒温培养箱全部恢复稳定供电,连续运行30分钟,让箱内温度、仪器光源、机械扫描模块恢复稳定工作状态。
打开UniExplorer软件,在软件工程目录中打开本次实验原始工程,软件会自动识别已保存的全部时序Z轴图像、基线校正模板、孔位布局、SESA分割参数。
预览任意时间点原始成像,确认图像堆栈完整、无黑屏、无缺失切片,核对空白孔基线曲线,确认断电前基线数据无损坏。
2 微孔板与培养环境复核
不移动微孔板原有摆放位置,不打开板盖、不触碰封板膜,避免液面晃动、冷凝水滴落、菌体移位。
使用温度记录仪读取板架周边实时温度,对比实验设定标准温度,温差控制在0.3℃以内再启动扫描;温差过大则继续恒温静置平衡,直至温度回归标准值。
快速执行一次单孔预览扫描,观察孔底菌体、菌丝分布、液面气泡、冷凝水状态,和断电前成像对比无明显变化,方可接续监测。
3 软件接续扫描参数设置
进入时序扫描任务界面,软件会自动识别已完成的全部时间节点,自动跳过已采集的时序,从断电中断的下一个时间点继续执行Z轴循环扫描,无需重新设置完整监测周期。
保持原有扫描参数不变:Z轴扫描层数、测量间隔、曝光增益、BCA动态基线校正、SESA分割阈值全部沿用断电前模板,不修改任何成像定量参数。
在软件实验备注栏记录断电起止时间、断电时长、箱内温度波动数值,作为后期数据校正的溯源标记。
4 长期监测动态基线同步接续
开启持续动态BCA基线校正功能,接续扫描过程中软件会基于断电前基线持续更新背景,抵消断电温度波动带来的轻微基线漂移。
全程保持静置培养模式,不开启振荡程序,防止菌体、菌丝因断电扰动出现分层偏移,影响后续成像定量一致性。
三 断电后数据校正与质控处理
1 时序数据分段标记处理
导出全部CSV动力学参数后,单独标注断电对应的时间区间,数据分析时区分断电前、断电恢复期、正常接续后三段数据。
短时间断电(≤30min,温差<0.5℃):整体曲线可完整拟合,仅在论文方法部分标注断电事件。
长时间断电(>60min,温差>1℃):断电前后两段数据分开拟合,不合并计算整条曲线的延滞期、生长速率、AUC,避免参数失真。
2 复孔与内参校正
以板内阳性对照菌株作为内参,对比断电前后同一菌株单位时间菌丝面积增长幅度,计算断电带来的生长偏移系数,对原始时序数值做线性校正,缩小系统误差。
若跨板对照实验单块板发生断电,该板数据仅作参考,最终统计以未断电平行板数据为主。
3 数据报废判定标准
断电期间箱内温度波动超过2℃,液体蒸发量明显改变,菌丝大面积移位、脱落,该板全部数据作废,需要重新接种培养。
电脑断电导致图像堆栈大量损坏、时序文件丢失,无法接续完整定量分析,实验作废重新开展。
四 断电预防配套长效方案
1 硬件供电防护
仪器主机、控制电脑、恒温培养箱统一接入UPS不间断电源,短时停电由UPS持续供电,完全避免中途断电中断扫描。
长周期丝状真菌监测必须配备UPS,断电续航时长不低于2小时,覆盖常规停电抢修时长。
2 工程自动备份设置
在UniExplorer软件设置自动备份,每2小时自动保存一份工程副本至硬盘其他分区,防止单次断电损坏唯一工程文件。
3 实验记录规范
所有实验统一记录供电状态、断电故障、温度波动数据,保证数据结果可溯源,满足重复性实验要求。
