一 基础说明

UniExplorer软件不内置Lambert-Pearson抑菌模型拟合功能。完整操作分为两大阶段：第一阶段在UniExplorer完成实验数据采集、曲线质控、AUC积分、数据导出；第二阶段将CSV数据导入Origin软件，完成Lambert-Pearson非线性拟合。下面提供可直接复现的分步操作教程。

二 UniExplorer软件完整操作教程

1 载入工程与原始曲线质控

打开UniExplorer，载入已完成时序扫描的工程文件。

绘图界面Y轴选择菌体像素总面积，优先使用该指标，TA浊度作为辅助参考；X轴设置为培养时间。

逐条查看各组生长曲线，双击曲线调取对应时间点Z轴堆叠图像。标记并剔除异常孔：存在药物结晶、持续气泡、冷凝水滴落、菌体大面积移位的样本，不纳入后续计算。

确认质控有效：阳性对照组呈现完整S型生长曲线，阴性空白基线平稳，溶剂对照组与阳性对照无明显差异。

2 设置统一积分区间（关键步骤）

打开积分工具，人为锁定统一的积分起始时间和积分终止时间。所有组别必须使用完全相同的积分区间，禁止不同组别使用不同起止时间。

启用动态BCA基线校正，调用实验预先采集的空白基线模板，削弱基线缓慢漂移带来的误差。

3 批量计算曲线AUC与相对生长系数Fa

选中单条曲线，使用Integrate积分功能，软件自动输出该曲线下面积AUC。

按住Ctrl多选同一药物浓度下所有生物学复孔，批量执行积分，记录全部复孔AUC数值。

建立数据表进行换算：Fa = 给药组AUC平均值 ÷ 阳性对照组AUC平均值。Fa范围0～1，数值越接近1代表抑制作用越弱。

4 时序数据批量导出

打开软件Export导出菜单；

导出字段勾选时间戳、像素总面积、TA浊度、各组AUC结果；

文件编码选择UTF-8，保存格式设置为CSV；

文件命名标注菌株、培养温度、pH、积分起止时间，方便后期溯源。

建议同时保存完整工程文件，保留全部原始图像堆栈，便于后续复核异常数据。

5 数据预处理整理

使用Excel打开导出的CSV文件，新建拟合专用数据表，保留两列核心信息：

第一列：药物浓度；第二列：对应浓度Fa均值；额外新增一列标准差，用于绘图添加误差棒。

三 Origin软件Lambert-Pearson模型拟合分步教程

1 导入数据表

打开Origin，新建工作表，将整理完成的浓度、Fa均值、标准差粘贴至表格，X列为药物浓度，Y列为Fa相对生长系数。

2 启动非线性拟合模块

顶部菜单栏依次选择：分析 → 拟合 → 非线性曲线拟合。

在函数编辑界面录入Lambert-Pearson模型表达式，设置合理参数初始值。

初始参数参考设置：拐点浓度初始值设置在预估MIC附近；陡度参数初始值设置区间1～3，避免迭代不收敛。

3 添加参数约束与选择迭代算法

设置参数边界约束，保证生物学意义：拐点浓度大于0，陡度参数大于0。

拟合迭代算法选择Levenberg-Marquardt算法，开启全局拟合选项。

点击拟合执行运算，软件自动迭代计算，输出拟合曲线、参数估值、标准误差、决定系数R²。

4 拟合结果评估

重点查看决定系数R²，R²＞0.9代表拟合效果良好；R²＜0.85，需要返回核查原始实验数据，排查梯度设计、药物析出、基线校正等问题。

提取关键输出参数：无抑制浓度NIC、拐点浓度、曲线陡度参数。

5 绘图输出

绘制离散实验观测点，叠加Lambert-Pearson平滑拟合曲线；

X轴为药物浓度，Y轴为Fa相对生长系数；

在图中标注NIC、动力学MIC关键阈值，利用标准差添加误差棒，形成标准SCI图表。

四 常见问题排查方案

1 拟合无法收敛

回到UniExplorer复核实验梯度，缺少中等抑制区间会直接造成拟合失败；可在临界抑制区间增设细分浓度梯度。

适当调整Origin内参数初始迭代值，缩小参数取值边界范围。

剔除高浓度下存在大量药物析出、理化干扰的浓度组别。

2 拟合R²数值偏低

调取UniExplorer时序图像，排查药物沉淀、乳滴干扰；优先使用像素面积数据，不单独依靠TA浊度。

核对所有组别积分起止时间是否统一，积分区间不一致会破坏剂量效应关系。

3 Fa数值大于1

代表给药组生长水平高于阳性对照组，多由基线漂移导致；重新启用UniExplorer动态BCA基线校正，再次计算AUC。