噬菌体后效应指噬菌体处理宿主细菌后，大部分菌体发生裂解，残存耐受菌、抗性突变体经过一段休眠调整后重新恢复增殖。传统OD浊度法仅能观测整体光密度变化，难以精准判定裂解谷底、菌体复苏起始节点，无法精确量化恢复延滞时长。oCelloScope依托无标记Z轴堆叠时序成像，持续追踪裂解阶段、菌体空白窗口期、细菌复苏全过程，依靠图像分割算法区分细菌完整细胞与裂解碎片，精准捕捉复苏起点，定量恢复生长延滞期、复苏速率，用于评价噬菌体持久抑菌能力、抗性菌株产生潜力。
二、标准化微孔实验操作流程
1. 微孔体系搭建
选用96孔微孔板，设置实验组：宿主菌+噬菌体处理组、宿主菌不加噬菌体阳性对照组、空白培养基对照组。可增设噬菌体梯度浓度组别，分析剂量对后效应的影响。统一细菌初始接种密度、噬菌体滴度，消除初始浓度带来的数据偏差。每组设置3~4个生物学重复。
2. 仪器参数设置
恒温培养，按需开启低速间歇振荡，缓解菌体沉降；时序图像采集间隔设置15–40 min，完整覆盖细菌裂解阶段、裂解低谷、复苏全过程。开启Z轴堆叠成像，区分悬浮活菌与微小裂解碎片；全程锁定曝光、增益、对焦参数，保证各组数据横向可比。总监测时长需要延长至细菌明显复苏之后，避免仅观测裂解阶段而遗漏复苏过程。
3. 实验观测关键节点标记
细菌正常生长阶段；噬菌体引发裂解，生物量持续下降阶段；裂解谷底（最低生物量平台期）；复苏起点；恢复对数生长阶段。
三、UniExplorer软件数据分析策略
1. 算法选用
SESA算法：统计总菌体投影面积，生成完整动力学曲线；
SEAL算法：单细胞分割，依据细胞形态、尺寸区分完整活菌与裂解碎片，剔除碎片信号干扰，防止碎片误判为生物量。
2. 核心定量指标
动力学指标：裂解启动时间、最低生物量、复苏延滞期（裂解谷底至细菌恢复增殖的时间间隔）、复苏阶段最大生长速率、复苏后稳态生物量；
评价指标：通过复苏延滞期长短判断噬菌体后效应强弱，延滞时间越长，持久抑菌效果越好；对比不同处理组复苏菌体增殖水平，评估抗性菌群增殖能力。
3. 数据校正方法
空白孔扣除培养基背景噪声；过滤气泡、杂质干扰；剔除裂解碎片产生的虚假信号，保证复苏时间点判定准确。
四、常见实验干扰与优化对策
1. 细菌裂解碎片干扰信号识别：依靠SEAL形态筛选，设置细胞尺寸阈值过滤微小碎片，区分活菌与残渣；
2. 菌体沉降造成视野波动：启用间歇振荡，图像采集前短暂静置；
3. 监测时长不足错过复苏阶段：依据预实验结果延长监测周期；
4. 孔内水分蒸发改变培养基环境：选用适配封板膜，降低渗透压波动对细菌复苏的影响。
五、论文材料方法标准英文描述
The post-phage effect and lag phase of bacterial regrowth were quantified using the oCelloScope time-lapse imaging system. Host bacterial suspension was mixed with phage and inoculated into 96-well microplates. Bacteria-only positive control and medium blank control were set simultaneously. Microplates were incubated at constant temperature, and Z-stack tilted images were captured at regular intervals throughout the whole experiment. The SESA algorithm was used to acquire biomass dynamics, and the SEAL algorithm was applied to distinguish intact bacterial cells from lysis debris. The lag phase of regrowth was defined as the duration from the lowest biomass plateau to the onset of bacterial recovery. At least three biological replicates were included for each treatment.
中文释义：
采用oCelloScope时序成像系统定量噬菌体后效应与细菌恢复生长延滞期。宿主菌悬液与噬菌体混合后接种于96孔微孔板，同步设置仅细菌阳性对照组与培养基空白对照组。微孔板恒温培养，实验全程按照固定间隔采集Z轴倾斜堆叠图像。利用SESA算法获取生物量动态变化，SEAL算法区分完整细菌细胞与裂解碎片。恢复生长延滞期定义为最低生物量平台期至细菌复苏增殖起点的时间跨度。每组处理至少设置三组生物学重复。
六、适用研究场景
噬菌体持久抑菌效果评价、抗性细菌复苏动力学研究、噬菌体与抗生素联用抑制细菌复苏、不同噬菌体鸡尾酒延缓菌体复苏筛选、环境条件调控噬菌体后效应机制探究。