一、传统检测方式针对成团菌丝的缺陷
1. 浊度OD检测只可以读取上清液透光程度,大量菌丝团聚沉淀在微孔底部,上层培养液清澈,吸光度数值偏低,容易误判微生物生长受到抑制,无法识别孔底团聚存活的菌丝总量。
2. 菌丝团大小不一、分布随机,依靠肉眼只能够粗略观察菌丝絮团多少,不能够完成标准化定量,不同人员观察结果偏差较大,实验重复性较差。
3. 菌丝团内部存在休眠菌体、耐受亚群,普通终点检测无法区分表层活菌和菌丝团深层菌体,很难观测抗真菌药剂穿透菌丝团聚体的动力学过程。
4. 培养液当中的色素、植物残渣、悬浮颗粒物会干扰分光光度读数,粗提取物筛选时极易产生假阳性和假阴性结果。
二、oCelloScope成像定量针对液体成团菌丝的各项优势
1. Z‑stack三维分层扫描适配沉降菌丝团
设备能够沿Z轴逐层对焦扫描整孔培养液,从上清液体直至微孔底板。不管菌丝絮团悬浮在培养液中层或是沉降底部,分层图像都可以捕捉所有菌丝团聚体,不会因为菌体沉淀造成检测数值偏低,完整采集全部菌丝的空间分布信息。
2. FluidScope倾斜照明分辨成团菌丝内部结构
普通垂直照明容易让厚实菌丝团产生强光反光、阴影遮挡。倾斜光源可以提升菌丝边缘对比度,区分菌丝团聚外圈菌丝、致密内层菌体,能够观察药物处理之后菌丝团表层瓦解、内部菌体陆续受损的全过程。
3. SSA形态算法过滤杂质,单独识别菌丝团
算法开展图像分割的时候依靠形态、连通域特征筛除培养基沉淀、灰尘、提取物颗粒,只标记菌丝连通结构。可以自动统计菌丝团数量、单团投影面积、总菌丝覆盖面积、絮团平均粒径,实现客观的参数量化,规避人为主观误差。
4. BCA活菌生物量区分活菌丝团和死亡碎片
系统仅统计结构完整的活菌结构,裂解后的菌丝残骸、破碎碎屑不会计入生物量。面对药物胁迫下成团菌丝表层菌体坏死、内层菌体依旧存活的现象,可以分别得到活生物量参数,判断菌丝团存活状态。
5. 时序动态监测菌丝团聚、解体全过程
长时间延时成像能够记录孢子萌发‑细小芽管‑菌丝聚集‑絮团成型‑药物侵蚀解体完整动态。可对比菌丝团聚集速度、成团大小,解析受试物质是抑制菌丝聚集,还是直接杀伤菌丝菌体。
6. 分层动力学评估药剂穿透菌丝团聚屏障
借助不同深度层级的BCA数据,对比菌丝团外层和深层活菌生物量变化,定量抗菌物质穿透致密菌丝絮团的渗透动力学,这点是OD检测手段无法实现。
