益生菌发酵葡萄糖酸钠母液生长曲线测定与分析
本研究拟以提取葡萄糖酸钠后的母液作为营养物质，利用酿酒酵母菌、双歧杆菌及乳酸菌独特的糖类发酵能力，探讨益生菌发酵葡萄糖酸钠母液的可行性。以期在获得大量益生菌提高葡萄糖酸钠母液附加值，为葡萄糖酸钠母液再利用提供方向。
生长曲线的测定
①挑取酿酒酵母、双歧杆菌和乳酸菌分别接种于A培养液中，摇床震荡过夜培养，以获得处于生长对数期的活化种子液。
②将活化好的酿酒酵母菌、乳酸菌、双歧杆菌、双菌剂1和双菌剂2按10%的接种量接入A培养液中，并置于37℃下培养箱中培养；每隔4 h取样，10倍梯度稀释，并涂布平板。
③以培养时间（h）为横坐标，各时间所对应的活菌浓度（CFU/ml）为纵坐标，绘制各菌的生长曲线并计算代时[8]。
式中：t1、t2——选取微生物进入指数生长期后，细胞数量增长最快的两个时间点（h）；
x1、x2——t1、t2时间点分别对应的每毫升培养液中可培养的细胞数量（CFU/ml）。
益生菌生长曲线测定结果
将10%体积的酿酒酵母菌、双歧杆菌、乳酸菌、双菌剂1、双菌剂2分别接种到A培养液后，测定生长曲线。为方便比较双菌剂中的酿酒酵母菌生长，酿酒酵母菌在37℃条件下培养。单菌培养曲线见图1～图3。
从图1酵母菌的生长曲线看出，酿酒酵母在A培养液中生长4 h左右进入对数期；培养至12 h，酿酒酵母菌到达稳定期，最高浓度为7.5×107CFU/ml。37℃培养时，酿酒酵母菌在A培养液中的代时约为1.50 h。
从图2双歧杆菌的生长曲线数据得出，双歧杆菌在37℃培养条件下，16 h时进入对数期；培养32 h达到稳定期，双歧杆菌活菌最高含量达到4.5×109CFU/ml。在A培养液，37℃培养，双歧杆菌生长代时为1.36 h。
图1酿酒酵母菌在A培养液中的生长曲线
图2双歧杆菌在A培养液中的生长曲线
图3乳酸菌在A培养液中的生长曲线
乳酸菌单菌培养生长曲线见图3。在A培养液中，37℃条件下，乳酸菌培养8 h进入对数期，12 h达到稳定期。乳酸菌浓度最高达到5.7×109CFU/ml，由计算得出，在A液培养液中，37℃条件下，乳酸菌生长代时为0.81 h。
酿酒酵母菌和其他菌在进行双菌培养时，有可能起到促进作用也有可能起到抑制作用。本试验将双歧杆菌、乳酸杆菌分别和酿酒酵母菌混合，等体积制成双菌剂，接入A培养液中培养，绘制各自生长曲线。
图4 BM1在A培养液中的生长曲线
图5 BM2在A培养液中的生长曲线
双歧杆菌和酿酒酵母菌混合接种到葡萄糖酸钠母液后，37℃培养，定时取样绘制生长曲线见图4。
从图4中可以看出，37℃培养条件下，双歧杆菌和酿酒酵母菌两种菌混合培养比各自单独培养的生长曲线表现为适应期延长，稳定期拖后。混合培养时，双歧杆菌最高浓度达到1.8×108CFU/ml，代时为1.80 h；酿酒酵母菌最高浓度达到3.5×107CFU/ml，代时为2.10 h。双歧杆菌和酿酒酵母菌都比单独培养时浓度降低（4.3×109CFU/ml和4.0×107CFU/ml），代时延长（0.44 h和0.60 h）。
乳酸菌与酿酒酵母菌等量混合后的菌液在A培养液中的生长曲线见图5。
对比乳酸菌与酿酒酵母菌两种菌单独培养的生长曲线菌和混合培养生长曲线，可以看出混合后两种菌同样表现为适应期延长，稳定期拖后，浓度明显低于各自单独培养。乳酸菌与酿酒酵母混合培养时，乳酸菌最高浓度达到5.6×109CFU/ml，代时为1.42 h；酿酒酵母菌最高浓度达到3.8×107CFU/ml，代时为2.52 h，均比单独培养时浓度降低（0.1×109CFU/ml和3.7×107CFU/ml），代时延长（0.61 h和1.02 h）。