怎么知道护手霜菌落总数有没有超标【实验】
检测化妆品菌落总数时，为使菌落在培养基中清晰可辨，允许在卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基中添加2，3，5-三苯基氯化四氮唑（以下简称TTC）。文章以护手霜为样品基质，分别加入适当菌含量的大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、酵母工作菌悬液，制备5mg/100mL浓度的TTC卵磷脂、吐温80-营养琼脂，同时以不添加TTC卵磷脂、吐温80-营养琼脂平板进行验证，以营养琼脂培养基作为对照，对菌落计数结果进行对比。结论：添加了5mg/100mLTTC的培养基用于化妆品菌落总数检测时对G+有明显的抑制作用，建议在日常检测过程中需慎重选择。
化妆品中富含脂肪、蛋白质、氨基酸、维生素、无机盐等营养成分，是微生物良好的碳源和氮源，为微生物的生长、繁殖提供了良好的条件。菌落总数是判定化妆品被污染程度的标志，在实际工作中，乳膏状样品常因检验样品含有沉渣给菌落鉴别造成一定的困难。为了有利于菌落计数，在培养基中加入适量的TTC，它能被细菌还原成为红色物质使菌落呈红色[1]，目前化妆品的微生物学质量及检验方法依据《化妆品安全技术规范》（2015版），菌落总数的检验所用培养基为卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基，在必要时可以使用5mg/100mL TTC[2]。该浓度TTC对化妆品菌落总数测定是否有影响，文章通过实验做一些探讨。
1材料与方法
1.1培养基
5mg/100mL TTC卵磷脂吐温80-营养琼脂培养基：国药集团化学试剂有限公司；磷脂吐温80-营养琼脂培养基：北京陆桥技术有限责任公司；营养琼脂：北京陆桥技术有限责任公司；灭菌生理盐水：国药集团化学试剂有限公司。
1.2样品
护手霜：淘宝。
1.3菌种
金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希氏菌ATCC25922、酵母ATCC9763、蜡样芽孢杆菌ATCC11778，以上菌种均由北京陆桥技术有限责任公司提供。
1.4仪器
高压灭菌器：日本HIRAYAMA；恒温培养箱：微生物快速立体计数仪，BioSense；上海一恒科技有限公司；冰箱：海尔集团
2方法
2.1菌液的制备
分别接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、酵母、蜡样芽孢杆菌的新鲜培养物至10mL营养肉汤培养基中，36℃培养24h，上述培养物用无菌生理盐水度稀释，制成每1mL含菌量在30～300CFU的菌悬液。菌液制备后，保存在2～8℃，在24h内使用。
2.2供试液的制备
取10g护手霜加入到装有玻璃珠及90mL灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡制成1：10供试液。
2.3实验方法
2.3.1菌液试验
分别取2.1中的菌液2mL，分别注入两个平皿中，加入培养基，于36℃培养48h，测定菌液中的菌落数。
2.3.2样品对照试验
取2.2中的1：10供试液2mL，分别注入两个平皿中，加入培养基，于36℃培养48h，测定样品中的菌落数。
2.3.3验证试验
取2.2中的1：10供试液1mL和2.1中的菌液1mL分别注入同一平皿中，同时做平行，加入培养基，于36℃培养48h，测定菌落数。
3结果与讨论
表1结果表明5mg/100mL TT C对革兰氏阴性杆菌的生长繁殖无影响，但对革兰氏阳性葡萄球菌有较强的抑制作用，结果显示无细菌生长。酵母在36℃生长较差，且不显色[3]。在实际工作中，菌落计数选择在30～300CFU之间，菌落容易计数，没必要加入TTC，减少TTC对细菌的毒性。如果遇到样品含较多颗粒，需要添加TTC时可以参考陈得云[4]等试验在每100mL培养基加入TTC浓度2～3mg，可使多数菌落显色且不抑制细菌的生长。
4结论
应用TTC指示剂在化妆品菌落总数测定，便于区别化妆品中的颗粒与细菌，结果易于观察，计数快速准确。《化妆品安全技术规范》（2015版）中用5mg/100mL浓度的TTC在试验中菌落均能显色（酵母除外），但对金黄色葡萄球及蜡样芽胞杆菌有较强的抑制作用，故在使用TTC进行菌落计数会造成检测结果误差。
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