10-十一烯酸联合硫酸多黏菌素E的协同杀菌效果【试验】
摘要: 本文内容主要涉及10‑十一烯酸联合多黏菌素在制备抗菌药物中的应用，抗菌药物针对的细菌为大肠杆菌、沙门菌、肺炎克雷伯菌中的一种或多种。抗菌药物针对的细菌为耐多黏菌素的细菌。所述抗菌药物针对的细菌为多重耐药革兰阴性细菌。通过棋盘法最小抑菌浓度试验、体外细菌生长曲线证明10‑十一烯酸协同增效多黏菌素的抗菌活性，提供10‑十一烯酸在增效多黏菌素类抗生素抗菌活性中的新用途，可解决多黏菌素临床耐药性和治疗指数低等技术问题。
革兰阴性菌是临床常见的病原菌，严重影响人类健康与畜禽健康养殖。多黏菌素是治疗多重耐药革兰阴性菌感染的重要抗菌药物之一，然而，近年来，由于临床治疗中不规范用药，导致耐药菌的出现，严重削弱了多黏菌素的临床治疗效果。近年来，新的抗菌药物研发停滞不前，利用现有药物恢复现有抗生素的效果是一种经济有效的手段。10-十一烯酸是一种单链不饱和脂肪酸，天然存在于人体汗液中，在临床已被广泛用于抗真菌治疗，能有效抑制真菌的繁殖，常用于治疗头癣、股癣、足癣等皮肤真菌感染及真菌性阴道炎，能有效抑制白念珠菌的生物膜形成；此外，有研究表明，10-十一烯酸与L-精氨酸联用后能诱导浓度依赖性肿瘤细胞死亡。迄今为止，10-十一烯酸作为抗菌佐剂增效抗菌药物的抗菌活性尚未见报道。
为了解决多重耐药革兰阴性细菌治疗的技术问题，本文提供一种增强多黏菌素抗菌活性的方法，具体采用10-十一烯酸联用多黏菌素，多黏菌素优选硫酸多黏菌素E，二者不仅是简单的功能相加，而是达到协同增效抗菌作用。文末附10-十一烯酸和硫酸多黏菌素E的抗菌组合配比，为临床治疗细菌感染，特别是多重耐药革兰阴性细菌感染，具体如存在多黏菌素耐药基因(MCR)的细菌感染提供了新的治疗策略。
10-十一烯酸(10-Undecenoic acid)，CAS号：112-38-9，分子式：C11H20O2，分子量：184.28，购买自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，纯度为95％；称取一定量的10-十一烯酸使用DMSO配制成浓度为100mg/mL的10-十一烯酸母液，-20℃保存；
硫酸多黏菌素E(硫酸粘杆菌素，Colistin)，CAS号：1264-72-8，分子式：C52H100N16O17S，分子量：1253.53，购买于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，纯度≥19，000U/mg；称取一定量的硫酸多黏菌素E配制成浓度为2mg/mL的硫酸多黏菌素E母液，-20℃保存；
使用的细菌培养基：
CAMHB肉汤培养基购自BD碧迪医疗器械(上海)有限公司，配制方法如下：称取22.0g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121℃高压灭菌15min，备用；
MH琼脂培养基购自北京陆桥技术股份有限公司，配制方法如下：称取38.0g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121℃高压灭菌15min，冷至50℃倾注平板备用；
脑心浸液培养基(BHI肉汤培养基)购自北京陆桥技术股份有限公司，配制方法如下：称取本品24.5g，加热搅拌溶解于1L蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，备用。
10-十一烯酸联合硫酸多黏菌素E的协同杀菌分析：
时间杀菌曲线试验：
挑取大肠杆菌B2单菌落至BHI肉汤培养基中培养至对数生长期后备用，CAMHB肉汤培养基加入10-十一烯酸、硫酸多黏菌素E、10-十一烯酸和硫酸多黏菌素E混合液，加入菌液使初始菌量为1×106CFU/mL；
分组和剂量如下：
对照组(control)：只含菌液，10-十一烯酸、硫酸多黏菌素E终浓度为0；
10-十一烯酸(10-Undecenoic acid)：10-十一烯酸终浓度分别为2.5mg/mL；
硫酸多黏菌素E组(Colistin)：硫酸多黏菌素E终浓度分别为4μg/mL；
10-十一烯酸和硫酸多黏菌素E联合组：终浓度为2.5mg/mL 10-十一烯酸+4μg/mL硫酸多黏菌素E。
将培养液充分混匀后，置于恒温培养箱中，37℃静置培养。分别于第1h、3h、6h、12h和24h取100μL菌液涂布于直径为10cm的MH琼脂培养板上，培养过夜后进行菌落计数。
试验结果：
图10-十一烯酸联合硫酸多黏菌素E对大肠杆菌B2的协同杀菌结果
如图所示，针对大肠杆菌B2菌株，与对照组相比，硫酸多黏菌素E单独处理对细菌菌落数没有显著影响，10-十一烯酸单独使用后会使活菌数减少，但与对照组相比，活菌数减少程度较弱；当10-十一烯酸和硫酸多黏菌素E联合处理时，细菌活菌落数较对照组与10-十一烯酸或硫酸多黏菌素E单独处理组显著降低，在第1h时，活菌落数能降至0Log10
CFU/mL，即该组合浓度下能快速有效杀死细菌；
这些数据表明，10-十一烯酸和硫酸多黏菌素E联合处理后对大肠杆菌具有明显的协同杀菌功能。
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