金黄色葡萄球菌：红霉素、庆大霉素和氧氟沙星时间-抑菌生长曲线分析（一）
抗生素是目前治疗细菌感染的主要药物，其出现和使用为人类健康做出了不可磨灭的贡献，对动物疾病的预防与控制作用同样功不可没。但不规范用药则会引发畜禽的群体性危害，造成兽药残留超标、产生细菌耐药性和畜禽产品质量安全等问题。为了满足人类对动物性食品不断增长的需求，人们在畜禽养殖过程中常常大量使用抗生素类药物来预防动物性疾病并促进生长。抗生素的残留使得一些动物体内的细菌常暴露在抗生素环境中，体内的耐药菌株将会得到选择性增殖，使得抗生素的治疗效果下降。
金黄色葡萄球菌属于葡萄球菌属（Staphylococcus），是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染，是临床上重要的致病菌，特别是超级细菌-耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的出现及其耐药性的快速增长，使其成为全球内感染的首要病原菌。金黄色葡萄球菌常引起两类疾病：（1）化脓性疾病，主要引起动物的乳房炎、关节炎等，可通过动物传递给人类；（2）毒素性疾病，会引起人和动物的中毒性呕吐等，严重威胁人类的食品安全和公共卫生。
微生物比浊法能直观地反应抗生素总的抗菌能力，因此利用该原理，本文选择了庆大霉素、红霉素、氧氟沙星3种不同类型的药物，实时测定并绘制时间-吸光度抑菌生长曲线，以此分析3种药物在不同浓度下、不同时间节点上与细菌相互作用的关系，旨在为药效学的研究、解决细菌耐药性及指导临床合理使用抗生素提供数据和试验参考。
1材料与方法
1.1菌株来源
质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC29213，购自北京兰伯瑞生物技术有限责任公司；实验菌株DX1、XNC22于养殖场中分离获得。
1.2仪器
CLASSⅡ生物安全柜，购自美国NUAIRE公司；全自动高压灭菌器，购自日本三洋电器集团；恒温培养箱，购自德国BINDER公司；VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统，购自BIOMERIEUX公司；WBS-100微生物比浊法测定仪，购自北京先驱威锋技术开发公司。
1.3培养基与材料
抗生素检定培养基3号，购自北京中海生物科技有限公司；营养琼脂，购自北京陆桥技术有限责任公司；革兰氏阳性菌鉴定卡（GP鉴定卡），购自BIOMERIEUX公司；标准品购自中国兽医药品监察所或中国食品药品检定研究院。
1.4方法
1.4.1菌悬液的制备
根据美国临床和实验室标准化研究所（CLSI，Clinical and Laboratory Standards Institute）对菌悬液浓度的要求，来稀释菌悬液。将保存的菌种接种于配制好的营养琼脂培养基中，置于37℃培养箱中培养24h后取出待用，在生物安全柜中，用棉签取单菌落于装有0.85%灭菌生理盐水的安瓿瓶中，用麦氏比浊仪将试验菌液浓度调节为0.5麦氏（0.5麦氏菌悬液的浓度约为1.5×108cfu/mL），后进一步稀释至5×105cfu/mL，备用。
1.4.2储备药液的制备
将庆大霉素、红霉素、氧氟沙星标准品分别溶解并稀释成2048μg/mL的抗生素贮存液。配制的药液以质控菌株金黄色葡萄球菌ATCC®29213进行质控，其最低抑菌浓度（Minimum inhibitory concentration，MIC）值在CLSI允许的范围内。
1.4.3微量稀释法-药物敏感性试验
采用CLSI指定的微量稀释法，进行药物敏感性实验。取稀释至5×105cfu/mL浓度的菌液0.1mL分别加入含系列抗菌药物溶液的板中，混匀使试管中最终抗菌药物的浓度为原稀释浓度的50%，并设置阳性对照和阴性对照。将加有菌液和抗菌药物的板置37℃培养箱中培养18～20 h。观察记录结果，以无菌生长的最低抗菌药物溶液的浓度为MIC值。判定标准参照CLSI标准，具体见表1，按判断标准判断被检菌株的敏感性为敏感（S），中度敏感（I）或耐药（R）。