雪茄烟中霉菌培养基种类筛选、计数方法适用性研究（三）
2.1.3平板涂布法与平板倾注法的比较
GB法（孟加拉红琼脂培养基）比较结果如图10所示，各样品在两种接种方式下霉菌计数结果差异均在1个数量级内。通过独立样本T检验发现7个样品（A,B,D,E,G,I,J）的平板涂布法与平板倾注法之间存在显著差异，其中3个低,中浓度样品（B,D,E）的平板涂布法检测结果显著高于平板倾注法，4个中,高浓度样品（A,G,I,J）的平板倾注法检测结果显著高于平板涂布法。53.85%的样品计数结果存在差异性，表明两种接种方式间差异较大，对霉菌计数结果有较大影响。
YC/T法（改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基）比较结果如图11所示。4个样品（B,C,D,E）中平板涂布法与平板倾注法之间存在显著差异，且3个中,高浓度样品（B,C,D）的平板涂布法检测结果显著高于平板倾注法。30.77%的样品计数结果存在差异，且主要表现为平板涂布法检测结果高于平板倾注法，表明两种接种方式间差异较小，对霉菌计数结果影响不大。
Biokar法（SYMPHONY Agar快速显色培养基）比较结果如图12所示，仅有3个样品（B,C,L）的平板涂布法与平板倾注法之间存在显著差异。23.08%的样品计数结果呈现出差异性，且均表现为平板涂布法检测结果高于平板倾注法，表明两种接种方式间差异更小，对霉菌计数结果影响较小。
2.2霉菌计数方法的比较
3种霉菌计数方法及两种接种方式综合比较结果如表2所示。
表2 霉菌计数方法的比较Tab.2 Comparison of mould counting methods
| 类型 | GB法 | YC/T法 | Biokar法 | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 平板倾注法 | 平板涂布法 | 平板倾注法 | 平板涂布法 | 平板倾注法 | 平板涂布法 | |
| 培养基 | 孟加拉红琼脂培养基 | 预制平板 | 改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基 | 预制平板 | SYMPHONY Agar快速显色培养基 | 预制平板 |
| 前期准备 | 培养基46 ℃±1 ℃水浴保温 | 预制平板 | 培养基45 ℃±1 ℃水浴保温 | 预制平板 | 培养基44~47 ℃水浴保温 | 预制平板 |
| 操作步骤 | 繁琐 | 便捷 | 繁琐 | 便捷 | 繁琐 | 便捷 |
| 培养方式 | 28 ℃±1 ℃恒温培养 | 28 ℃±1 ℃恒温培养 | 28 ℃±1 ℃恒温培养 | 28 ℃±1 ℃恒温培养 | 25 ℃恒温培养 | 25 ℃恒温培养 |
| 培养时间 | 5 d | 5 d | 2~5 d | 2~5 d | 54 h~3 d | 54 h~3 d |
| 菌落生长速率 | 较快 | 较快 | 较快 | 较快 | 较慢 | 较慢 |
| 菌落分布 | 不均匀 | 均匀 | 不均匀 | 均匀 | 不均匀 | 均匀 |
培养基的选择：平板涂布法接种适用于GB法推荐的孟加拉红琼脂培养基和Biokar法推荐的SYMPHONY Agar快速显色培养基，平板倾注法接种更适用于YC/T法所推荐的改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基。无论是霉菌计数结果还是霉菌生长形态，不同培养基的效果不同，在试验研究过程中可以根据试验目的选择不同的培养基。
前期准备及操作步骤：不同计数方法和不同接种方式对于前期准备和操作步骤的要求不同。但各方法间对于平板倾注法接种的前期准备较为相似，均为将培养基在接种前进行水浴保温，且各水浴温度要求差异不大，但操作步骤繁琐。各方法间对于平板涂布法接种的前期准备要求均为提前预制平板，操作步骤便捷。
培养时间：3种霉菌计数方法均为传统微生物学检测方法，由于霉菌生长的特殊性及样品的差异性，各方法中对于培养时间的要求不尽相同。GB法,YC/T法和Biokar法对培养时间的要求分别为5 d,2~5 d和54 h~3 d，GB法与其他两种方法相比培养周期较长，不利于霉菌快速计数，Biokar法可以在更短的培养时间内实现对样品中霉菌的计数。
菌落形态：根据图5和图9中霉菌生长形态的差异性，无论是培养基还是接种方式的不同，均会影响霉菌菌落形态的观察，而培养基对霉菌形态的影响明显大于接种方式。但无论平板涂布法还是平板倾注法接种方式，均表现出GB法所用孟加拉红琼脂培养基和YC/T法所用改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基更有利于霉菌生长形态的观察，而Biokar法所用SYMPHONY Agar快速显色培养基则更有利于霉菌计数。
判读计数：影响样品中霉菌判读计数的因素较多，在培养基和接种方式明确的条件下，菌落生长速率和菌落分布均匀度对于判读计数有重要影响。由于霉菌生长的特殊性，菌落生长速率较快不利于霉菌计数，稍不注意便会造成菌落蔓延而无法计数。3种培养基进行比较，孟加拉红琼脂培养基和改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基菌落生长速率较快，不利于霉菌计数，而SYMPHONY Agar快速显色培养基菌落生长速率较慢，有利于霉菌计数。除霉菌生长速率外，菌落分布均匀性也影响霉菌的判读计数，而接种方式对于菌落分布的影响更大。平板倾注法接种并培养后，菌落分布不均匀且菌落还可能生长在培养基内部，而平板涂布法接种并培养后霉菌菌落在培养基表面分布均匀,更易于观察与计数。
3结论
①3种培养基在同种接种方式条件下，雪茄烟中霉菌计数结果的一致性较好，其中Biokar法培养周期短，霉菌生长缓慢，可避免菌落快速蔓延，更利于计数，GB法和YC/T法则更适用于对霉菌菌落的形态观察。②相同培养基在不同接种方式条件下，雪茄烟中霉菌计数结果存在差异。与平板倾注法相比，平板涂布法操作简单，霉菌菌落均匀分布于培养基表面，适合大批量样品检测。
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