2.4 相关标记蛋白的表达

与Con组比较,TGF-β1组的N-cadherin、FN、Vimentin、α-SMA的表达显著上升(t=66.452,403.664,161.580,136.670,P<0.05),而E-cadherin、β-catenin的表达显著降低(t=261.827,154.260,P<0.05)。与TGF-β1组比较,sali 1 μg·mL-1组、sali 5 μg·mL-1组、sali 10 μg·mL-1组和sali 20 μg·mL-1组的N-cadherin、FN、Vimentin、α-SMA的表达均显著降低(F=53 988.214,82 179.748,33 362.584,64 734.791,P<0.05),而E-cadherin、β-catenin的表达显著升高(F=54 726.455,63 095.118,P<0.05)。见图4和表1。

图4 相关标记蛋白的表达

表1 6组相关标记蛋白的相对表达量

组别	E-cadherin	β-catenin	N-cadherin	FN	Vimentin	α-SMA
Con组	0.817±0.002	0.957±0.002	0.910±0.002	0.863±0.002	0.690±0.004	0.926±0.003
TGF-β1组	0.613±0.001①	0.693±0.003①	1.085±0.003①	1.078±0.002①	0.895±0.002①	1.202±0.001①
sali (1 μg·mL-1组)	0.629±0.003	0.673±0.001	1.099±0.001	1.085±0.002	0.891±0.003	1.218±0.002
sali (5 μg·mL-1组)	0.981±0.003②	1.147±0.002②	0.714±0.002②	0.730±0.003②	0.639±0.002②	0.842±0.004②
sali (10 μg·mL-1组)	1.035±0.002②	1.248±0.001②	0.551±0.002②	0.628±0.001②	0.527±0.002②	0.746±0.001②
sali (20 μg·mL-1组)	1.169±0.004②	1.264±0.004②	0.363±0.002②	0.476±0.002②	0.298±0.003②	0.518±0.002②

3 讨论

肿瘤细胞的侵袭和转移是恶性肿瘤发展的重要步骤,是导致恶性肿瘤患者死亡率高的重要原因。因此,为了控制恶性肿瘤的转移,研究肿瘤转移的机制和特点十分有必要。肿瘤转移是复杂的过程,首先肿瘤细胞脱离原发病灶,通过血管生成和基底膜重建进入循环系统,经淋巴管、血管,抵达靶器官,形成转移肿瘤。进入循环系统的肿瘤细胞要到达靶器官要克服循环系统的种种障碍,而EMT能令上皮细胞表型和表面抗原均发生改变,增强细胞的迁徙能力,促进肿瘤细胞的转移。上皮细胞之间连接紧密,游离面和基底面均有显著极性,且高度有序,形态相对稳定一致;EMT的发生使细胞间紧密的连接被打破,失去了原有的有序性,稳定性和极性,呈现出形态各异,排列松散的间质细胞特性。本研究首先探讨了红景天苷对肺腺癌PC9细胞增殖和凋亡影响,发现sali 5 μg·mL-1组,sali 10 μg·mL-1组和sali 20 μg·mL-1组的细胞增殖力下降且凋亡率显著升高,表明红景天苷可以抑制肺腺癌PC9细胞的增殖并促进凋亡;进一步,笔者通过细胞形态观察发现,Con组细胞形态多成椭圆形或者圆形,经过TGF-β1处理后,相邻细胞间连接也变得疏松。而经过红景天苷处理的细胞形态多半呈椭圆形,细胞之间连接较紧密,提示红景天苷减少肺腺癌PC9细胞EMT的发生。

在肿瘤恶性程度进展的过程中上皮细胞表面标记蛋白E-cadherin下调,表明肿瘤细胞的粘附能力下降,运动和浸润能力增强,而在神经系统和间质细胞中表达的N-cadherin上调。Vimentin和α-SMA是间质样细胞的标志性分子,通常在上皮细胞中不表达。具有高侵袭性的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞则通常伴有Vimentin和α-SMA的高表达,而将细胞中Vimentin或α-SMA沉默之后,细胞明显减弱甚至失去侵袭迁移能力。在本研究中,sali 5 μg·mL-1组,sali 10 μg·mL-1组和sali 20 μg·mL-1组的Vimentin和α-SMA的表达均显著降低,而E-cadherin的表达显著升高,N-cadherin显著降低,提示TGF-β1组的细胞发生上皮细胞向间质细胞的转化,经不同浓度红景天苷处理后,sali 5 μg·mL-1组,sali 10 μg·mL-1组和sali 20 μg·mL-1组的Vimentin,FN,α-SMA表达下调,提示细胞的EMT减弱,红景天苷能明显减少肺腺癌PC9细胞EMT的发生,预防肿瘤细胞的迁移和侵袭,与形态学观察的结果一致。

β-catenin蛋白肽链中部arm区域,可以和E-cadherin、上皮生长因子受体(EGFR)等蛋白结合而发挥多种功能。β-catenin对细胞的转移和EMT有关键的调控作用,同时也是Wnt信号通路中的关键蛋白,其在细胞质中的浓度直接影响着Wnt信号通路。在正常的上皮细胞中,细胞核内β-catenin含量较少,大量的外源性转录因子并不能引发细胞的EMT现象,而在肿瘤细胞中,由于β-catenin的调控系统障碍使β-catenin在核内聚集,外源性的转录因子可以诱导细胞发生的EMT改变。另一方面,β-catenin和E-钙黏素胞内区相连,形成β-catenin/E-cadherin复合体,该复合体在维持上皮极性,稳定性和完整性中发挥重要作用。本研究中sali 20 μg·mL-1组β-catenin表达显著升高,说明红景天苷通过上调β-catenin抑制细胞中EMT的发生。

综上所述,TGF-β1可诱导肺癌细胞上皮细胞向间质细胞转变,红景天苷可能通过上调β-catenin抑制肺癌细胞中EMT的发生,减少间质细胞的数量,延缓肿瘤细胞的迁移。

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