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​布鲁菌血培养仪结果及生长曲线特点研究

布鲁菌是一种动物源性人畜共患病病原菌,可引起布鲁菌病。临床表现为多汗、反复发热、关节痛、肝脾肿大。人类对布鲁菌普遍易感。布鲁菌病以皮肤接触感染为主,是牧业人员和某些职业人群感染布鲁菌的主要途径;其次,饮用生乳和食入污染布鲁菌的食物而发生消化道传染。临床布鲁菌主要分离自血液,由于此菌临床分离较少,关于该菌在Bact/Alert血培养仪上生长曲线特点的研究极少见。


本院于2011年4月—2013年1月从15例患者血液中分离出15株布鲁菌,通过观察布鲁菌在Bact/Alert血培养仪上生长曲线特点,可帮助我们预测该菌株生长,协助临床快速诊断布鲁菌病。实验室对布鲁菌病的诊断有重要作用,从发热布鲁菌病患者的血液中或慢性感染患者的组织(如骨髓)中分离布鲁菌是诊断该病的金标准。

结果


绝大多数细菌是以二分裂方式繁殖,所以可以将生长和繁殖的整个过程分为迟缓期、对数生长期和稳定期。繁殖速度快的菌种一般迟缓期较短,繁殖速度慢的菌种一般迟缓期较长。图1a为本实验室培养出金葡菌生长曲线,葡萄球菌属细菌生长期曲线有一定的倾斜可见迟缓期、对数生长期及稳定期3个阶段,生长期曲线角度较大;图1b是本实验室培养出布鲁菌生长曲线,布鲁菌迟缓期曲线较平坦,3 d左右阳性报警,生长期曲线短,稳定期曲线平坦;图1c是本实验室培养出大肠埃希菌生长曲线,肠杆菌科细菌迟缓期较短,生长期生长迅速,甚至无稳定期。

图1血培养葡萄球菌、布鲁菌、肠杆菌科细菌生长曲线


讨论


布鲁菌的生长曲线不同于肠杆菌科细菌、葡萄球菌,与不发酵糖革兰阴性杆菌生长曲线相同。李新等[6]报道,不发酵糖革兰阴性杆菌在血培养仪上生长曲线的特点是:生长期所对应的纵轴较短,迟缓期和稳定期曲线较平坦,阳性报警时间均值18.8 h。陈日荣等[7]观察肠杆菌科细菌、葡萄球菌、不发酵糖革兰阴性杆菌、链球菌属细菌、肠球菌属细菌及真菌的生长曲线,结果与李新等报道的相同,阳性报警时间均小于24 h。本院分离的15株布鲁菌在Bact/Alert 3D血培养仪上的生长曲线与不发酵糖革兰阴性杆菌的特点相同,阳性报警时间均值63.9 h,只有1株菌在36 h出现生长期,较其他14株菌生长期出现早。由此可见布鲁菌的生长曲线特点虽然与不发酵糖革兰阴性杆菌相同,但阳性报警时间较晚。有研究表明,在布鲁菌流行地区使用血培养仪监测系统,大部分布鲁菌在3 d内可获得阳性结果[8]。内蒙古自治区是布鲁菌病流行地区,本研究中15株布鲁菌均在3 d左右检出。如出现上述生长曲线时,应高度怀疑为布鲁菌,后续的操作都应在生物安全柜中进行,转种的平皿要延长培养时间,因大多数布鲁菌在血平皿及巧克力平皿上需要48~72 h以上才能生长出肉眼可见的菌落。注射器抽取血培养瓶中液体直接进行尿素水解试验,结合涂片革兰染色细菌形态特点或柯氏染色可以提示布鲁菌生长,比从平皿选取菌落进行上述试验提前24~48 h。


用布鲁菌诊断血清即可确定布鲁菌,但不能鉴定到种。在选用治疗药物时可根据鉴定到属的结果。鉴定到种和生物型水平有助于流行病学研究。通常不推荐进行布鲁菌药物敏感试验,大多数布鲁菌病治疗失败并非由于细菌耐药。


布鲁菌侵袭力较强,可以通过黏膜、完整皮肤、呼吸道感染人类,在体内有很强的繁殖和扩散能力。由于布鲁菌对人有极强的致病力,常可导致实验室获得性感染,被认为是潜在的生物恐怖病原菌,气溶胶是实验室获得性感染的主要原因。实验室感染可能与未在生物安全柜内处理阳性血培养标本有关。国外文献有实验室暴发感染的相关报道。我国近年也有实验室感染布鲁菌的相关报道。因此,必须严格遵守实验室安全操作规程,处理感染性材料时,特别是处理布鲁菌等具有高度传染性的标本时,需要在3级生物安全防护下进行操作。实验室工作者应认识到气溶胶传播的危险,适当使用生物安全防护,降低实验室获得性感染的风险。


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