香芹酚对恶臭假单胞菌生长、运动能力、产胞外蛋白酶和生物被膜能力影响（三）
2.3香芹酚对恶臭假单胞菌产嗜铁素和胞外蛋白酶的影响
由于嗜铁素平板由铬天青、十六烷基三甲基溴化铵和铁离子组成，故呈蓝色（图3A）。当细菌产生嗜铁素时，嗜铁素平板会出现淡黄色晕圈，这是由于嗜铁素对Fe3＋选择性黏着，对Fe3＋具有一定的亲和性。由图3A可知，空白对照组、DMSO对照组、0.005%和0.010%组均出现黄色晕圈，且呈逐渐减小趋势，0.015%、0.020%、0.025%组均未见黄色晕圈，表明香芹酚能够抑制恶臭假单胞菌产嗜铁素的能力，且香芹酚含量越高，抑制效果越明显。不同小写字母表示组间差异极显著（P＜0.01）。下同。
图3不同体积分数香芹酚对恶臭假单胞菌产嗜铁素（A）和胞外蛋白酶（B、C）的影响
由图3B可知，平板上的空白对照组和DMSO对照组出现较大的白色透明圈，说明恶臭假单胞菌分泌的蛋白酶分解了平板中的蛋白质，导致白色透明圈的产生。而香芹酚处理后，白色透明圈直径减小，且香芹酚含量越高，白色透明圈直径越小，表明香芹酚能够抑制恶臭假单胞菌胞外蛋白酶的产生。由图3C可知，香芹酚体积分数为0.025%时，透明圈直径比空白对照组减小31.15%。0.015%、0.020%、0.025%组的透明圈直径极显著小于空白对照组（P＜0.01），说明香芹酚能够抑制恶臭假单胞菌胞外蛋白酶的产生，且香芹酚含量越高，抑制效果越好。由此可知，香芹酚能够抑制恶臭假单胞菌胞外蛋白酶产生，可有效阻止其对蛋白质的利用，减缓食品腐败变质，在肉及肉制品等高蛋白食品保鲜中具有巨大的应用潜力。
2.4香芹酚对恶臭假单胞菌产生物被膜的影响
细菌生物被膜有复杂的三维结构，是细菌黏着在接触表面后分泌的多糖类物质、脂质蛋白、脱氧核糖核酸等组成的复合物，其包裹方式可有效保护内部细菌，增强细菌对环境的抵抗力，有利于其在恶劣环境中生存。由图4可知，香芹酚对恶臭假单胞菌生物被膜的产生呈现浓度依赖性抑制作用。香芹酚含量越高，生物被膜抑制作用越明显。与空白对照组相比，当用0.015%～0.025%香芹酚处理恶臭假单胞菌后，其产生的生物被膜减少50.9%～86.35%。0.025%组恶臭假单胞菌生物被膜产量极显著低于空白对照组（P＜0.01），说明香芹酚能够抑制恶臭假单胞菌产生物被膜，且香芹酚含量越高，抑制效果越好。Addo等研究发现，香芹酚和桉树脑可通过干扰细菌的运动能力分别抑制金黄色葡萄球菌和阴沟杆菌的生物被膜形成；刘楠也发现，香芹酚对荧光假单胞菌的生物被膜有破坏作用。与本研究结果一致。综上，香芹酚可以有效抑制恶臭假单胞菌生物被膜的产生能力。
图4不同体积分数香芹酚对恶臭假单胞菌生物被膜产生能力的影响
2.5香芹酚对恶臭假单胞菌核酸泄漏的影响
细胞膜是具有弹性的半透性膜，可选择性地交换物质，菌液中大分子含量变化是反映细胞膜渗透性变化的重要指标，如果大分子含量变化显著，说明细胞膜可能受到了严重损坏。由图5可知，随着香芹酚含量增加，核酸泄漏量增多；随着处理时间的延长，恶臭假单胞菌核酸泄漏量增多。经香芹酚处理15 min后，0.005%～0.025%组核酸泄漏量比空白对照组增加41.32%～77.84%；处理45 min后，0.005%～0.025%组核酸泄漏量比空白对照组增加60.43%～82.97%。香芹酚处理15、30、45、60 min，0.005%～0.025%组核酸泄漏量均极显著高于空白对照组（P＜0.01）。Zhang Junshun等研究表明，香芹酚会破坏细菌细胞膜，改变其细胞膜渗透性，导致核酸泄漏，最终导致细胞死亡。本研究结果中，核酸泄漏物变化趋势与Ma Maomao等在研究香芹酚和独活素对大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌的协同作用中的变化趋势相似，Abdelhamid等研究中也发现香芹酚能够抑制沙门氏菌生长，导致细菌细胞内核酸泄漏，且具有浓度依赖性，与本研究结果相似。
图5不同体积分数香芹酚对恶臭假单胞菌核酸泄漏的影响
3、结论
本研究采用不同体积分数的香芹酚处理恶臭假单胞菌，观察香芹酚对恶臭假单胞菌的抑菌效果。结果表明，当香芹酚体积分数≥0.015%时，对恶臭假单胞菌的生长、运动能力、产胞外蛋白酶和生物被膜能力具有显著的抑制作用。此外，核酸泄漏结果表明，香芹酚能够引起胞内物质泄漏，破坏恶臭假单胞菌的细胞完整性。综上所述，香芹酚对恶臭假单胞菌具有良好的抑制作用，在高蛋白食品如肉及肉制品保鲜中具有巨大的应用潜力。
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