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牦牛源多杀性巴氏杆菌C47-8株体外生长曲线的测定结果

来源:中国兽医杂志 发布时间:2024-04-17 10:31:05 浏览:95 次

牦牛出血性败血症是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,P.multocida)引起的牦牛的一种以高热、肺炎、间或呈现急性胃肠炎以及内脏器官广泛出血为特征的急性传染病,被列为青海省重点防控的疫病之一。


根据GenBanK中发表的多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,P.multocida)HN06株(登录号为NC017027)的ompH核苷酸序列设计合成一对特异性引物,将PCR扩增获得的牦牛源P.multocida C47-8的ompH基因片段连接到pMR10载体上,构建了C47-8株ΔompH缺失株互补质粒pMR10-ΔompH,并将该质粒电转化至C47-8ΔompH缺失株中,成功获得其互补菌株。


在此基础上,对C47-8亲本株、ΔompH缺失株以及互补株的生物学特性进行研究。形态学观察结果表明,3株菌的生长形态无差异;生化试验结果表明,除了缺失株发酵蕈糖、硝酸盐试验呈现阳性外,3株菌的其余生化特性未发生改变;体外生长曲线表明亲本株C47-8的生长速度比缺失株和互补株的生长速度慢,说明ompH基因对C47-8的生长有显著影响。本试验为深入研究P.multocida的致病机制以及研制安全有效的基因缺失减毒活疫苗奠定了基础。


体外生长曲线的测定按文献的方法测定3个菌株的OD600值,绘制细菌体外生长曲线,每个菌株做3个重复,用SPSS19.0软件进行分析,并根据生长曲线测定出细菌的代时。


体外生长曲线的测定将P.multocida菌液每隔1 h测定3次OD600值,将得到的数据用SPSS19.0软件进行统计学分析,并绘制体外生长曲线,结果见下图。

C47-8亲本株、缺失株和互补株体外生长曲线的测定结果


从图可知,亲本株生长速度较慢,而缺失株和互补株则生长速度较快,由此可以确定ompH基因明显影响了C47-8的生长。


根据生长曲线测定出细菌的代时(G)C47-8亲本株代时为1.248 h,缺失株为0.727 h,互补株为0.765 h。表明C47-8亲本株代时最长,互补株居中,缺失株最快,说明ompH基因的缺失影响了P.multocida的生长。


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