25种天然植物精油对蓝莓致病菌生长曲线、抑制作用（四）
3讨论与结论
蓝莓果实脆嫩多汁、营养丰富，采后易遭受病原菌侵染而大量腐烂。为降低蓝莓采后的经济损失，通过分离、鉴定引起蓝莓腐烂的优势病原菌并对其进行控制。形态学和分子测序是鉴定病原菌种类的常用方法，依据4种菌株在PDA上生长的菌落特征、显微镜下的分生孢子梗和分生孢子的形态特征对其进行初步鉴定，初步判定病原菌I、II、III和IV分别为青霉（Penicillium spp.）、曲霉（Aspergillus spp.）、链格孢霉（Alternaria Nees）和镰刀菌（Fusarium spp.）。致病性分析发现4种菌的致病力排序为I＞II＞III＞IV。形态学鉴定不能很好地区分同属的病原菌种类，而保守基因测序可进一步将病原菌区分。?ebeljan等通过ITS、BenA、CaM和RPB2基因鉴定出了梨果中的致病菌为皮落青霉；Zhang Yusen、Choi和张婷等根据ITS、BenA、CaM测序差异对土壤以及稻谷中的曲霉分离株进行了新分类物种鉴定，并且从稻谷中分离鉴定出了塔宾曲霉。
Gannibal和Fulcher等验证了链格孢菌在目前的分子技术中物种界定并不明确，统称为链格孢菌。在本研究中，根据形态学特征和3种基因（ITS、BenA和CaM）的测序，分离获得的4种致病菌分别为皮落青霉、塔宾曲霉、链格孢菌和串珠镰刀菌。罗冬兰等在贵州粉蓝蓝莓中分离到了链格孢菌、灰葡萄孢菌以及胶孢炭疽等，且主要致腐菌为胶孢炭疽。刘春燕等在四川蓝莓中分离鉴定出了黑曲霉、青霉、噬木枝状枝孢菌、类拟盘多毛孢菌和链格孢菌5种优势致病菌。周倩等在辽宁蓝莓中分离鉴定出了青霉、产黄青霉和链格孢菌3种优势致病菌。由此看出，不同地区蓝莓上的优势病原菌略有差异，可能是因为各地区气候、地质以及蓝莓品种不同导致。为了更好地了解优势病原菌的生长特性，测定了它们的生长最适温度、生长曲线以及孢子萌发情况，发现病原菌皮落青霉和链格孢菌对低温的耐受性较好，在4℃条件下仍能生长，它们的最适生长温度为25℃左右，与Camardo和范文忠等测定的最适生长温度结果一致。
塔宾曲霉对低温耐受性较差，但对高温耐受性较好，最适温度在28℃左右，与陈江研究的塔宾曲霉生长状态一致。因此，针对皮落青霉和塔宾曲霉引起的蓝莓病害，采取低温保鲜的效果可能较差，建议低温结合药物抑菌处理；而塔宾曲霉的防控可采取低温贮藏防控，温度较高会加速病害的发生。3种菌的快速生长期均在2～3 d，孢子在培养12 h均能完全萌发。因此，果实在采摘后应尽早进行抑菌处理控制病原菌的生长进程。
植物精油具有易挥发、纯天然、广谱性抑菌以及低毒或无毒的天然优势，被广泛用于采后果蔬的防腐保鲜。Ceylan等通过测定番茄果实的品质以及营养物质含量，发现一定剂量的鼠尾草精油能够有效保持“Sentino F1”番茄冷藏期间的果实品质。王轶楠探究了山苍子精油对辣椒疫霉病的防治效果，2 mg/mL山苍子精油对辣椒疫霉的相对防治效果达到了68%。本实验探究了包括丁香罗勒精油、茉莉精油、山苍子精油和快乐鼠尾草精油等25种天然植物精油对蓝莓致病菌的作用效果，发现茉莉精油、丁香罗勒精油、续断精油、山苍子精油和红景天精油在体外对蓝莓果实4种致病菌的生长具有高效的抑制作用，且其作用浓度均不高于2μL/mL。Rath等发现茉莉精油在31.25μL/mL时才能完全抑制大肠杆菌的生长，与本研究结果不同。有研究表明，10μL丁香罗勒精油在48 h时的抑菌圈直径大于40 mm，对青霉、链格孢菌、灰霉以及根霉均具有较强的抑制作用。续断精油对黄曲霉有较好的抑制效果，在800 mg/L时对黄曲霉菌的抑菌率为10.96%。红景天精油高于0.625μL/mL对黑曲霉具有较好抑制作用。
进一步检测茉莉精油、丁香罗勒精油、续断精油、山苍子精油和红景天精油对皮落青霉、塔宾曲霉、链格孢菌和病原菌IV的抑菌MIC和MFC，发现山苍子精油和丁香罗勒精油的作用效果最佳，MIC和MFC更小，基本上低于1μL/mL。类似地，孙畅、黄晓霞和Li Yanjun等发现山苍子精油对意大利青霉菌和黄曲霉的MIC分别为1.17、0.80μL/mL，对黄曲霉的MFC为1.50μL/mL，能有效抑制柑橘病斑直径的扩散。丁香罗勒精油对香蕉炭疽的MIC和MFC分别为275μL/L和600μL/L。这些结果表明，茉莉精油、丁香罗勒精油、续断精油、山苍子精油和红景天精油具有广谱的抑菌作用，但其作用浓度在不同物种病原菌上存在差异。
因此，进一步探究了这5种精油在控制蓝莓病害发生中的作用，与5种精油体外高效的抑菌作用不同，苍子精油熏蒸处理对蓝莓果实的青霉病具有最佳的控制效果，在贮藏第6天时果实发病率仅为15%，其次为茉莉精油处理（发病率比对照组低27.5%），续断精油和红景天精油仅对蓝莓青霉病具有微弱的控制效果（与对照无显著差异），而丁香罗勒精油完全没有表现出病害控制效果。体内和体外实验作用效果的差异可能受多种因素的影响，如处理方式、使用浓度、精油的稳定性和穿透性等的影响。在活体实验中，熏蒸方式可能会影响精油的分布和接触病原菌的机会，从而影响抑菌效果。
另外，本实验仅使用MFC进行活体实验，该浓度可能不是丁香罗勒精油、茉莉精油、续断精油和红景天精油的最佳作用浓度。此外，丁香罗勒精油、续断精油和红景天精油在体外实验中表现出较高的抑菌活性，但在体内实验中，精油的稳定性和穿透性可能会受到果实表皮等生物屏障的影响，从而影响其抑菌效果。因此，精油在应用过程中应综合考虑各种影响因素。尽管如此，本研究证实山苍子精油和茉莉精油处理对蓝莓致病菌具有较好的控制体外和体内控制作用，可用于控制采后蓝莓腐烂损失。
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