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复方苍术挥发油对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的抑制作用

来源:江西化工 发布时间:2024-06-15 19:27:14 浏览:130 次

复方苍术挥发油以苍术、艾叶、降香、白术、白芷、石菖蒲等富含挥发油成分的中药材为原料提取制得,可用于制备一种中药香薰液。中药烟熏是我国传统的防疫手段之一,可用于医院等人员密集场所的空气消毒,还可缓解患者焦虑和疼痛等症状。选用苍术、艾叶等制成的香薰油对金黄色葡萄球菌等有明显的体外抑菌作用,能有效保护小鼠上呼吸道黏膜及黏膜免疫功能,且对呼吸道黏膜无刺激作用。目前,挥发油的提取方法有水蒸气蒸馏法、溶剂提取法、辅助萃取法等,水蒸气蒸馏法是目前实验室及工业上应用最普遍的方法,其技术成熟,操作方式简单。本研究用水蒸气蒸馏法从中药复方中提取挥发油,通过单因素实验分析不同加水量、浸泡时间和提取时间下复方苍术挥发油的提取率,并采用正交试验对提取条件进行优化,以期提高挥发油提取率,并对复方苍术挥发油的抑菌活性进行初步研究,为其工业化生产及应用提供参考。


复方苍术挥发油体外抑菌活性试验


菌悬液的制备


将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌活化,接种于LB培养基,将白色念珠菌活化,接种在SDA培养基中,在36℃条件下培养24 h。取各供试菌的菌悬液,用无菌蒸馏水稀释至合适倍数,用平板计数法测定菌液浓度,使菌液浓度为1×107-5×107CFU/mL。


对菌体生长曲线的影响


用分光光度计测定菌悬液的吸光度(OD),根据吸光度的数值判断菌液浓度。在菌悬液中加入复方苍术挥发油制成挥发油质量分数为1%的培养基;在菌悬液中加入阿莫西林或酮康唑使其浓度为50μg/mL,作为阳性对照组;以菌悬液为阴性对照组。将以上培养基置于37℃、130 r/min的摇床中培养12 h,每小时取样1次,于600 nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标,培养时间为横坐标,绘制供试菌体的生长曲线。


大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌阴性对照组的生长曲线在培养数小时后吸光度会显著增加,8~9 h后吸光度趋于平稳;而在挥发油或阿莫西林的作用下,大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌的生长曲线非常平缓,12 h反应结束时与其初始状态下的吸光度基本一致,即菌悬液中加入复方苍术挥发油后大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌无明显增殖,复方苍术挥发油对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的生长有抑制作用。


下图所示为复方苍术挥发油对白色念珠菌生长曲线的影响,阴性对照组的含菌量在3 h后逐渐增加,用复方苍术挥发油处理后的样品溶液含菌量也呈增加趋势,但其吸光度值低于阴性对照组,而经酮康唑处理的阳性对照组生长曲线较平缓,说明复方苍术挥发油对白色念珠菌有一定的抑制作用,但其作用较弱。

图复方苍术挥发油对白色念珠菌生长曲线的影响


结论


预实验中初步考察了提取温度(100℃、105℃、110℃)对挥发油提取率的影响,温度升高,挥发油提取率略有升高,综合考虑到操作的经济性,选择提取温度为105℃,但未作进一步考察。


提取工艺研究以复方苍术挥发油提取率为参考指标,首先采用单因素试验考察加水量、浸泡时间、提取时间对水蒸气蒸馏法中复方苍术挥发油提取率的影响。在此基础上,通过正交试验优化了复方苍术挥发油的提取工艺参数,确定最优工艺条件为加10倍量的水,浸泡30 min,回流提取6 h,在此条件下,复方苍术挥发油提取率平均值为0.654%。根据生长曲线结果可知3种供试菌的生长曲线经复方苍术挥发油处理后均有改变,且处理后大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的吸光度值基本不变,说明复方苍术挥发油可以抑制3种供试菌的生长繁殖,且对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的影响明显优于白色念珠菌。该研究结果可为复方苍术挥发油的工业化生产提供依据,为复方苍术挥发油的临床应用等研究提供参考,但复方苍术挥发油成分复杂、水溶性差、易氧化,其成分分析、活性及制剂等还有待进一步研究。


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