红景天苷对人肺腺癌细胞的上皮-间质转化的影响及作用机制（一）
摘要
目的 探索红景天苷(sali)对人肺腺癌细胞的上皮-间质转化的影响及其作用机制。 方法 将肺腺癌PC9细胞随机分为6组:对照组(Con),转化生长因子β1(TGF-β1)组,sali 1 μg·mL-1组,sali 5 μg·mL-1组,sali 10 μg·mL-1组,sali 20 μg·mL-1组。肺腺癌PC9细胞在5 ng·mL-1的TGF-β1刺激30 min后,再各组给予对应浓度sali干预,Con 组不做TGF-β1和sali干预处理。各组分别在干预后24,48,72 h后进行MTT检测,绘制生长曲线;在各时间段显微镜下观察细胞形态,以流式细胞仪检测细胞凋亡率,以Western blotting检测上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、神经型钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN),β-连环蛋白(β-catenin)的表达。
结果 与TGF-β1组比较,sali 5 μg·mL-1组,sali 10 μg·mL-1组和sali 20 μg·mL-1组细胞增殖力均显著降低(P<0.05)。Con组细胞形态多成椭圆形或者圆形,TGF-β1组大部分细胞形态呈梭形,相邻细胞间连接也变得疏松,而sali 5 μg·mL-1组,sali 10 μg·mL-1组和sali 20 μg·mL-1组细胞形态均多半呈椭圆形,细胞之间连接紧密。sali 20 μg·mL-1组的细胞凋亡率均显著高于sali 5 μg·mL-1组和sali 1 μg·mL-1组;和TGF-β1组比较,sali 1 μg·mL-1组的标记蛋白无显著差异(P>0.05);sali 5 μg·mL-1组,sali 10 μg·mL-1组和sali 20 μg·mL-1组的N-cadherin,FN,Vimentin,α-SMA的表达均显著降低,而E-cadherin,β-catenin的表达显著升高(P<0.05)。 结论 TGF-β1可诱导肺癌上皮细胞向间质细胞转变;红景天苷可能通过上调β-catenin抑制肺癌细胞中上皮-间质转化(EMT)的发生。
肺癌仍是目前死亡率最高的恶性肿瘤之一。许多肺癌患者在就诊时已发生转移,多数肺癌患者死亡是由癌细胞转移引起,最近研究表明上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在肿瘤侵袭转移过程中起重要作用。EMT是指上皮细胞失去其上皮特征,获得间质特性的过程,它不仅参与胚胎形态的形成、心脏的发育和慢性退行性纤维化,而且促进肿瘤侵袭转移。
红景天苷(Salidroside)的化学名为对羟基苯乙基-β-D-葡萄糖苷,其苷元为对羟基苯乙醇,即酪醇。红景天苷具有广泛的生物活性,如抗炎、抗肿瘤、免疫调节,促进骨骼肌生长、抗氧化、增体质、抗疲劳、抗肌萎缩,保护肝脏、神经、肺、呼吸道、心脏以及降血糖、调血脂、抗肥胖等作用。WANG等证实了红景天苷对肺癌A549细胞的抑制作用是抑制了胞内氧化应激反应与磷酸化p38的表达。但红景天苷对肺癌细胞的研究鲜有报道。本研究以非小细胞肺癌PC9细胞为研究对象,以一定浓度的转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)处理后,给予不同浓度红景天苷处理,观察其对肺腺癌PC9细胞EMT的影响。
1 材料与方法
1.1 材料及试剂
人肺腺癌PC9细胞为上海肺科医院肺癌免疫研究室常规传代培养;小鼠抗人上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、神经型钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)、β-连环蛋白(β-catenin,美国Abcam公司,批号分别为Ab76055,Ab18203,Ab8978,Ab7817,Ab32572)。羊抗小鼠IgG(武汉Bioswamp公司,批号:PAB150009);DMEM(美国Hyclone公司,批号:SH30022.01B);TGF-β1(美国Peprotech公司,批号:100-21);纤维连接蛋白(FN)(北京Solarbio公司,批号:F8180);红景天苷(北京Solarbio公司,批号:SS8080,纯度HPLC≥98%)。红景天苷用DMSO溶解后,作用于细胞的浓度现配(1,5,10 和20 μg·mL-1 )。
1.2 仪器
酶标仪(美国Thermo公司,型号:Multiskan FC),恒温培养箱(美国Thermo公司,型号:311),显微镜(日本Nikon公司,型号:TS100-F),流式细胞仪(美国Beckman公司,型号:FC500 MCL)。
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