苗药头花蓼可抑制幽门螺杆菌(H.pylori)生长
观察苗药头花蓼对幽门螺杆菌(H.pylori)生长代谢及其相关基因的表达的影响。方法:将H.pylori菌接种于不同浓度的头花蓼培养基(头花蓼终浓度分别为64、32、16、8、4、2、1及0.5 g/L)，测定无H.pylori菌生长时头花蓼的最小抑菌浓度(MIC);将H.pylori菌接种于无头花蓼培养基(对照组)和头花蓼MIC培养基(头花蓼组)培养36 h，每隔4 h采用用酶标仪检测590 nm处的吸光度值，绘制H.pylori生长曲线;用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测2组H.pylori菌液生长代谢相关基因FrdA、FrdB、HyuA及Pfr的表达水平。
结果:头花蓼对H.pylori最低抑菌浓度MIC为4 g/L，头花蓼组H.pylori生长曲线位于对照组之下，Real－time PCR结果显示头花蓼作用后，头花蓼组生长代谢相关基因FrdA、FrdB、HyuA及Pfr基因mRNA均呈减弱趋势，差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论:头花蓼在体外对H.pylori具有明显抑制作用，可通过影响细菌生长代谢相关基因的表达来抑制H.pylori的生长。
绘制H.pylori生长曲线
取生长于哥伦比亚血琼脂上的H.pylori菌接种于液体培养基，用液体培养基稀释至含菌量为1011～1012cfu/L的菌悬液。参照文献［7］方法，取10个无菌24孔板，每个板设置头花蓼组及对照组，头花蓼组依次加入液体培养基、5%H.pylori菌悬液、相应体积的头花蓼溶液至其终浓度为MIC，对照组加入等体积的5%H.pylori菌悬液，用液体培养基定容至300μL，每个组设置3个重复孔。瞬时离心混匀后置于37℃微需氧培养箱培养36 h。以液体培养基调零，每隔4 h取出一个24孔板用酶标仪测其各个孔在590 nm处的吸光度值。根据3次重复实验数据求得OD590平均值，绘制H.pylori的生长曲线。
H.pylori生长曲线
头花蓼组H.pylori生长曲线有明显变化，细菌在对数期不能进入正常的生长高峰。头花蓼组的生长曲线位于对照组之下，表明头花蓼对H.pylori的生长有抑制作用，且主要抑制其对数生长期的细菌分裂。见图1。
图1头花蓼对H.pylori生长的影响
讨论
目前H.pylori对抗生素的耐药性日趋严重，探索新的理想的抗H.pylori药物具有重要的现实意义。头花蓼是一种传统苗药，含有没食子酸、原儿茶酸乙酯、没食子酸乙酯等11个化合物，本课题组前期研究发现，头花蓼具有抗炎抗菌的效果，但其相关机制尚不清楚。本试验证明，头花蓼对H.pylori标准株的MIC为4 mg/L，通过与其它抗H.pylori中药进行比较，H.pylori对头花蓼的敏感性明显高于其它中药(黄芩苷25～200 mg/mL;黄连素12.5 mg/mL)，表明头花蓼在抗H.pylori方面具有应用研究价值。生长曲线可反映微生物的群体生长规律，通过生长曲线的变化可揭示药物的抑菌效果，本研究发现，加入头花蓼后H.pylori生长曲线发生了变化，说明头花蓼中可能某些成份不利于H.pylori生长。