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链霉菌培养基的配制步骤及生长曲线的测定方法

一种链霉菌培养基的配制步骤、生长曲线的测定方法,包括以下步骤:

⑴链霉菌活化培养:将保藏于-80℃冰箱中的链霉菌涂布在MS固体平板培养基上,并在28℃培养箱中培养7天,即得平板菌种;


⑵链霉菌液体培养及时间梯度取样:在生长良好的平板菌种上取1cm2的孢子接种于装液量为10%的高氏一号液体培养基中,在28℃、160rpm的条件下培养;接种后每12h取一次样品,均匀分散菌丝体后使用去除尖端的1mL移液器吸头吸取菌液1mL,每个时间梯度取样设置三个平行;


⑶配制TTC溶液:称取2,3,5-氯化三苯基四氮唑粉末0.1g,放置在避光的离心管中,加入10mL浓度为10mg/mL的常温保存的PBS溶解,过滤除菌后每200μL TTC溶液分装在1.5mL的离心管中;⑷链霉菌与TTC反应:将TTC溶液以1%比例加入到步骤⑵取出的不同时间段样品中,室温避光反应30min,此时TTC反应后反应液中生成红色沉淀三苯基甲臢;


⑸吸光度测定:将反应液离心、去除上清并收集沉淀;随后向该沉淀中加入500μL二甲基亚砜溶液,室温避光溶解30min,形成红色溶液,该红色溶液离心后取上清液各200μL,加入96孔板中,以DMSO溶液作为空白对照,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其吸光度;


⑹生长曲线绘制:每个时间段样品的吸光度设置三个平行,使用AVERAGE函数求平均值,使用STDEVP函数计算标准误差;然后以测定时间为X轴,以490nm处的吸光值为Y轴,绘制散点图,对散点图进行非线性拟合,绘制生长曲线并得到拟合方程。


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