微量量热法研究金银花与灰毡毛忍冬对志贺痢疾杆菌生长代谢的影响（一）
摘要:采用微量量热法从生物热活性角度，对金银花与山银花的生物指纹图谱进行比较研究。本文以山银花中的灰毡毛忍冬为例，考察不同浓度的金银花与灰毡毛忍冬提取液对志贺痢疾杆菌的抑制作用和产热规律。以产热曲线和热动力学参数为评价指标，客观地表征金银花与灰毡毛忍冬对志贺痢疾杆菌生长代谢的影响，并对实验结果做了相似性分析。结果显示，金银花与灰毡毛忍冬有很强的抑制志贺痢疾杆菌作用且两者有很好的相似性。生物评价应与化学分析法相结合来控制中药质量，来共同确保中药的安全有效。
金银花 (Lonicerae japonicae Flos, 中文名 Jinyinhua, Lj.F)，来源于忍冬 (Lonicera japonica Thunb.) 的花蕾。作为一种著名的传统中草药，在临床上用于治疗痈肿、疔疮、丹毒、急性痢疾、咽炎、上呼吸道感染和温病发热等[1-5]。忍冬在山东省广泛栽培。山银花 (Lonicerae Flos, 中文名 Shanyinhua, L.F)，来源于灰毡毛忍冬 (Lonicera macranthoides Hand.-Mazz)、红腺忍冬 (Lonicera hypoglauca Miq.) 和华南忍冬 (Lonicera confusa DC.) 的花蕾。传统上，它们的花蕾被用作清热药和解毒药[3,6]，在湖南省广泛栽培。
在2005年版《中国药典》专著中，忍冬被记载为金银花的唯一来源，而其他3种忍冬属植物首次被记录为山银花的来源[7]。在2000年版及以前版本的《中国药典》专著中，所有这4种都被记载为金银花，但在2005年版《中国药典》专著中，它们被分为两类。忍冬、灰毡毛忍冬、红腺忍冬和华南忍冬属于忍冬科，作为金银花在中国已使用了数百年。关于它们是否应分为两类存在激烈讨论。一些专家认为，山银花可用于临床，以避免中药资源的浪费。在防治流感的中药中，金银花发挥着重要作用。然而，由于资源短缺，很难满足巨大的临床需求。山银花的产量远高于金银花，因此，如果能用山银花作为金银花的替代品，金银花的资源短缺问题将得到解决。为了解决这个问题并为它们的临床应用提供证据，本文首次对它们的生物活性进行了比较研究。
微量量热法是一种定量、廉价且多功能的方法，用于测量物理、化学和生物学中的各种反应。它是表征细胞生长过程的通用分析工具，已广泛用于研究药物与培养细胞之间的相互作用[8-11]。当微生物活性发展受到各种物质影响时，会产生热效应流，该热效应流直接与各种来源释放的能量增加或减少相关。该方法仅需了解初始和最终的能量状态，并且与生物体和反应途径无关。此外，可以通过长时间连续记录信号来轻松跟踪慢速反应，而无需任何系统干扰。
在本文中，不同于传统的化学成分测定，采用了一种动力学且精确的方法——微量量热法，专注于微生物生长的能量变化。应用该方法研究了金银花和灰毡毛忍冬对志贺痢疾杆菌生长的作用。
材料与方法
仪器 使用 Thermal Activity Monitor (TAM) Air 等温量热计（Thermometric AB，瑞典），一种八通道热导量热计，用于在等温条件下测量毫瓦范围内的热流，所有通道集中在一个可移动的块中，用于测量受金银花和灰毡毛忍冬影响的代谢产热输出。记录产热曲线直至信号返回基线[12]。
材料与试剂 志贺痢疾杆菌菌株由中国典型培养物保藏中心（武汉大学，武汉 430072，中华人民共和国）提供。志贺痢疾杆菌在乳糖肉汤（LB）培养基中生长，该培养基每升含 5 g NaCl、10 g 蛋白胨和 5 g 牛肉提取物。用 1 mol·L⁻¹ NaOH 和 1 mol·L⁻¹ HCl 将培养基 pH 调节至 7.0-7.2，并在 121℃ 下灭菌 30 分钟。根据微量热法监测，灭菌后的培养基未显示放热现象，表明在此情况下培养基未发生氧化。
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