环链棒束孢2018BY-1菌株生长曲线测定方法——结果、结论与讨论
2结果与分析
2.1最大吸收峰的确定
经测定，波长与吸光度的关系曲线如图1所示，随着波长的增加，吸光度呈现先上升后平缓的趋势，在410 nm处，菌液的吸收峰达到了最大值，为1.47，因此选用410 nm作为后续测定菌液吸光度的波长。
图1波长与吸光度的关系曲线图
2.2培养液稀释浓度的确定
如图2所示，环链棒束孢2018BY-1菌株在连续10 d的培养过程中，不接种不离心的培养液、高速离心后的上清液、高速离心后的上清液稀释10倍，3种液体变化趋势呈倒“V”型，3 d前及5 d后趋于平缓，吸光度均在第4天达到了最大值，分别为0.77±0.01、0.60±0.04、0.29±0.05。由此推测，马铃薯培养基的黄色色素对菌体浓度的测定有影响，但将离心后的上清液稀释10倍后，其吸光度值更接近于0，对环链棒束孢菌液的浓度的测定没有影响，因此在用浊度法测定时可先将培养液稀释10倍后再进行测定。
图2培养液中色素对吸光度的影响
2.3生长曲线的绘制
如图3所示，通过重量法、比浊法、显微直接计数法3种方法，研究环链棒束孢的生长规律，所得的生长曲线基本一致。0~3 d菌液生长缓慢，菌丝干重不超过0.05 g、OD410趋于0、孢子浓度不超过5.68×10^7个/mL，此时期为迟缓期；3~5 d菌液生长快速，菌丝干重、OD410值、孢子数均达到最大值，分别是0.22±0.00 g、0.64±0.03、4.14×10^8个/mL，此时期为对数期；5~6 d在最大值保持稳定，此时期为稳定期；6 d以后菌丝干重、OD410值、孢子数逐渐降低，此时期为衰亡期。
图3 3种方法绘制的环链棒束孢生长曲线图
注：A-重量法，B-比浊法，C-显微直接计数法
2.4环链棒束孢OD410值和孢子数量的关系
如散点图4所示，OD410值与孢子数量在对数期呈线性关系，随着OD410值的增加，孢子数也增加，其回归方程式为：y=134.18x+2.8023，R^2=0.9897（见图4）。
图4对数期环链棒束孢OD值和孢子数量的关系
3结论与讨论
一条典型的生长曲线分为迟缓期、对数期、稳定期和衰亡期4个生长时期。本研究确定了环链棒束孢的生长曲线，分别为0~3 d为迟缓期，3~5 d为对数期，5~6 d为稳定期，6 d后为衰亡期，这与一般微生物的生长周期一致。李华祥根据生物量（菌丝干重）和产孢量绘制白僵菌的生长曲线，结果显示，0~2 d为迟缓期，2~4.5 d为对数期，4.5~7 d为稳定期，7 d后为衰亡期。与白僵菌相较，环链棒束孢迟缓期较长，对数期、稳定期和衰亡期的时间较短，这可能与生长环境有关。
不同菌种的吸收峰不同。王敏等发现在波长330 nm处白腐真菌菌液吸收峰达到最大值；阎博等发现反硝化菌菌液在波长400 nm处达到最大吸收峰值；弗格森埃希菌和铜绿假单胞菌的最大吸收峰为600 nm。文中环链棒束孢菌液在410 nm处吸收峰达到最大值。
测定浊度时培养基色素是主要的影响因素。王敏等发现白腐真菌连续培养48 h，不接种不离心的培养液、高速离心后的上清液、高速离心后的上清液稀释10倍的3种液体的变化只在孢子数量上存在差异，离心后上清液稀释10倍后，其吸光度值接近于0。本文中环链棒束孢2018BY-1菌株在连续10 d的培养过程中，上述3种液体变化趋势呈倒“V”型，离心后上清液稀释10倍后，吸光度值接近于0，与前者研究相似，这也进一步验证了培养基的色素对菌体浓度的测定是有影响的。
在对数期，浊度法测出的OD值和显微直接计数法测得的孢子数存在较好的线性关系。相思宇等发现弗格森埃希菌对数期OD值与活菌数具有良好的线性关系；马勇等发现在对数期和稳定期，产油酵母菌Y1菌液的OD值与细胞数量之间均存在较好的线性关系。李勤发现在对数期和稳定期OD值和果酒酵母细胞数存在一定的线性关系。本文环链棒束孢2018BY-1菌株在对数期和稳定期的OD值和孢子数也存在较好的线性关系，与前者研究相似，故2种方法的测定结果都可以作为判定环链棒束孢是否进入对数期和稳定期的依据。
研究明确了环链棒束孢的生长曲线；通过稀释培养基的浓度可以降低培养基中黄色色素对菌液的影响；获得了对数期和稳定期的OD值和孢子数存在线性关系的结论。研究将为后期环链棒束孢代谢物的采集、孢子规模化生产提供理论依据。
相关新闻推荐
1、Zn2+、Cd2+、Cry1Ac蛋白单独及联合暴露对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的毒性作用（二）