基于血凝滴度检测绘制H1N1 型流感病毒（IVR-238）生长曲线（一）
摘要
目的
探究2023年由WHO公布的H1N1型毒株A/Victoria/4897/2022（AH1N1pdm09）制备的高生长重组流感病毒（IVR-238）的生长规律，为流感疫苗生产中的病毒培养时间提供指导。
方法
将H1N1型流感病毒（IVR-238）接种至9-11日龄鸡胚绒毛尿囊腔内，于温度33.0～35.0℃、湿度45%～65%的环境下进行病毒培养，分别在不同培养时间（24 h、32 h、48 h、56 h、64 h、72 h）收取鸡胚的尿囊液，进行血凝滴度检测以确定病毒增殖情况，并依据血凝滴度检测的结果及培养时间绘制出病毒的生长曲线。
结果
H1N1型流感病毒（IVR-238）滴度在24～56 h呈上升趋势，56～64 h趋于稳定，处于平稳期，在64～72 h呈下降趋势。
结论
H1N1型流感病毒（IVR-238）接种鸡胚后，在24～56 h迅速增殖，病毒量在56～64 h趋于稳定，处于平稳期，在64～72 h呈下降趋势。H1N1型流感病毒（IVR-238）的最佳病毒培养时间为56～64 h。
甲型流感病毒是最重要的人畜共患病病原体之一，可引起严重的症状。据世界卫生组织估计，全球约有300万至500万人感染流感，导致约29万至65万人死于严重呼吸道疾病相关并发症。流感病毒毒株的快速变异导致了疫苗的边际递减效应、病毒耐药性，以及每年出现的新毒株，是引起世界大流行的重要原因。
对于病毒来说，有两种不同的机制引起遗传变异：突变和重组。通过这两个过程产生基因的多样性。人类流感病毒的进化主要表现为两种形式：(1)抗原漂移，其特点是变化小，是季节性流感的一个主要特征；(2)抗原转移，其特征是变化较大，是大流行流感的一个主要特征。流感病毒易变异主要是因为流感病毒是分节段RNA病毒。RNA是流感病毒的核心，也是流感病毒的遗传物质。流感病毒的RNA是分节段的，每个节段就是一个基因组，不同的基因组之间就像积木一样，容易重新拼装。当多个流感病毒体聚集到一起，不同病毒体之间的基因组发生重排的概率很高，重排之后形成新的RNA，出现新的病毒体，从而产生变异。
病毒具有一个或几个核酸分子组成的基因组，有一层蛋白或脂蛋白保护性外壳，且可在一定宿主细胞中自我复制的感染性因子。由于这种特性，病毒需要另一种生物体，即宿主才能生存。流感最有可能在全世界范围内出现大流行，提前注射流感疫苗能够有效预防感染流感。WHO每年9月（南半球）和2月（北半球）对下一个年度流感疫苗毒株发布建议。此次试验采用的毒株为2023年WHO最新公布的H1N1型毒株A/Victoria/4897/2022（AH1N1pdm09）的重配株（IVR-238）。
流感病毒裂解原液的生产系用世界卫生组织（WHO)推荐的并经国家药品监督管理部门批准的甲型和乙型流行性感冒（简称流感）病毒株分别接种鸡胚，进行病毒培养，冷胚后收获含病毒的尿囊液，经预过滤、澄清过滤（微滤）、除菌过滤，加甲醛进行病毒灭活；对灭活后的单价病毒液超滤浓缩、蔗糖密度梯度离心、分子筛层析纯化后加入裂解剂Triton X-100裂解病毒；采用超滤法去除裂解剂，经除菌过滤成为单价原液。如何及时、高效地生产出甲型流感疫苗，以给人们提供有效的保障是我们今天所探求的。生产应用中，病毒生长量测定的准确度决定了其生长曲线测定结果的准确度，准确地测定生长曲线对于生产实践有着重大的指导意义。
1 材料与方法
1.1 鸡胚
全自动孵化机孵化9～11日龄成活的鸡胚。
1.2 毒种
2023年WHO公布的H1N1型毒株A/Victoria/4897/2022（AH1N1pdm09）的重配株（IVR-238）。并由本企业进行传代制备而成的工作代，并使用毒种稀释液（PBS生理缓冲液）进行105稀释，摇匀后待用。
1.3 主要试剂及耗材
氯化钠注射液购自山东齐都药业有限公司、U型血凝板和加样槽CORNING公司、磷酸盐缓冲生理氯化钠溶液（简称PBS，自制）。
1.4 1%鸡血红细胞悬液的制备
用吸取了1 ml抗凝剂的注射器，采鸡翅下静脉血约4 ml，轻轻混合后，放入装有10 ml抗凝剂的离心管中，经2000 rpm离心10分钟，弃上清液，沉淀物加入生理氯化钠溶液轻轻混合后，经2000 rpm离心10分钟，移去上清，重复以上过程至少三次，直至上清液清亮，即得压积鸡血红细胞。准确量取一定体积的压积鸡血红细胞，压积鸡血红细胞与生理氯化钠溶液按体积比1：99混合均匀，即配成1%鸡血红细胞悬液，2～8℃保存，7天内使用。
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