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沼泽红假单胞菌R1菌株的培养基配方、培养条件、生长量及影响因素(一)

来源:饲料工业 发布时间:2024-06-15 18:51:00 浏览:11 次

2.1.3沼泽红假单胞菌R1培养基的优化


以甘油为碳源,氯化铵为氮源,磷酸氢二钾为磷源,添加微量元素溶液、维生素溶液,设计正交试验L16(45),试验设计见表1,其培养基优化试验结果见表2。由表2可知,对沼泽红假单胞菌R1的生长的影响因素为C>B>D>A>E,因素C磷源磷酸氢二钾为主要影响因素,其它依次为因素B氮源氯化铵、因素D复合微量元素、因素A碳源甘油、因素E复合维生素。其适宜的培养基配方为A2B2C3D1E3,即甘油1.0 g、氯化铵1.0 g、磷酸氢二钾0.3 g、微量元素溶液0.05 ml、维生素溶液0.15 ml、蒸馏水1 000 ml。


2.2沼泽红假单胞菌R1培养条件的优化



2.2.1接种量对沼泽红假单胞菌R1生长的影响


沼泽红假单胞菌R1分别按照体积比的2%、4%、6%、8%、10%接入液体菌种于优化后的培养基200 ml中,于30℃、40 W白炽灯距离20 cm处下静置培养72 h,结果见图3。由图3可知,随着接种量的增加,沼泽红假单胞菌R1菌数OD660值不断增加,当接种量为6%时达到最大值,再加大接种量则OD660值呈现逐步下降趋势,分析原因可能为随着接入沼泽红假单胞菌菌数的增加造成培养基营养的匮乏造成的,其适宜的接种量为6%(V/V)。

图3不同接种量对沼泽红假单胞菌R1生长的影响


2.2.2初始pH值对沼泽红假单胞菌R1生长的影响


分别调整优化后的培养基初始pH值至5.0、6.0、7.0、8.0、9.0,灭菌冷却后,接入6%的沼泽红假单胞菌R1液体菌种,于30℃、40 W白炽灯距离20 cm处照射静置培养72 h,结果见图4。由图4可知,沼泽红假单胞菌R1较适宜的pH值范围为6.0~8.0,pH值7.0时达到最大值,偏酸、偏碱均不利于其生长。

图4不同pH值对沼泽红假单胞菌R1生长的影响


2.2.3温度对沼泽红假单胞菌R1生长的影响


将优化后的培养基初始pH值调整为7.0,灭菌冷却后,接入6%的沼泽红假单胞菌R1液体菌种,分别置于培养温度25、30、35、40℃,40 W白炽灯距离20 cm处静置培养72 h,结果见图5。由图5可知,沼泽红假单胞菌R1在设置的温度下均能生长,较适宜的培养温度为30~35℃,30℃时达到最大值,40℃时菌数OD660值下降较多。


2.2.4光照强度对沼泽红假单胞菌R1生长的影响


将优化后的培养基初始调整为pH值7.0,灭菌冷却后,接入6%的沼泽红假单胞菌R1液体菌种,30℃,分别置于25、40、60、100 W白炽灯下距离20 cm处照射静置培养72 h,结果见图6。由图6可知,较适宜的为40 W白炽灯下照射,随着白炽灯功率W的增大,菌数OD660值明显下降,分析原因可能为沼泽红假单胞菌R1不需要较强的光照强度。

图5不同温度对沼泽红假单胞菌R1生长的影响

图6不同光照强度对沼泽红假单胞菌R1生长的影响


2.2.5装液量对沼泽红假单胞菌R1生长的影响


初始pH值7.0,具塞磨口250 ml三角瓶中分别装入优化后液体培养基50、100、150、200 ml,灭菌冷却后,接入6%的沼泽红假单胞菌R1液体菌种,30℃、置于40 W白炽灯下距离20 cm处照射静置培养72 h,结果见图7。由图7可知,250 ml三角瓶中装入50 ml液体培养基中测定的菌数OD660值最大,随着装液量的增加,菌数OD660值呈下降趋势。分析原因可能为在少量氧气存在的情况下,沼泽红假单胞菌R1生长更好一些,少量氧气可以促进沼泽红假单胞菌R1的生长。

图7不同装液量对沼泽红假单胞菌R1生长的影响


2.2.6最佳培养条件的确定


优化后的液体培养基调整初始pH值7.0,250 ml三角瓶中装入50 ml培养基,接种量为6%(V/V),30℃、置于40 W白炽灯下距离20 cm处照射静置培养7 d,沼泽红假单胞菌R1菌数OD660值可达2.066,经双层平板计数法检测沼泽红假单胞菌R1菌数可达5.6×108个/ml。


3结论


①根据生产实际需要,经优化后沼泽红假单胞菌R1其适宜的培养基配方为:甘油1.0 g、氯化铵1.0 g、磷酸氢二钾0.3 g、微量元素溶液0.05 ml、维生素溶液0.15 ml、蒸馏水1 000 ml。


②经优化后沼泽红假单胞菌R1其适宜的培养条件为:初始pH值7.0、培养温度30℃、接种量为6%、装液量为液体培养基50 ml/250 ml三角瓶、40 W白炽灯下距离20 cm处照射静置培养。


③采取以上适宜的培养基、培养条件下进行培养,沼泽红假单胞菌R1菌数OD660值可达2.066,经双层平板计数法检测沼泽红假单胞菌R1菌数可达5.6×108个/ml。


沼泽红假单胞菌R1菌株的培养基配方、培养条件、生长量及影响因素(一)

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