泰妙菌素对几种病原菌的体外药敏试验研究
泰妙菌素是一种半合成二萜类抗生素，又名泰妙灵、支原净。系由伞菌科北风菌（Pleurotus mutilis）培养液中提取获得。本品的延胡索酸盐为白色或类白色结晶粉末，无臭、无味。其在乙醇中易溶，在水中溶解。可用于防治鸡慢性呼吸道病、猪喘气病、传染性胸膜肺炎、猪密螺旋体性痢疾等。过去常使用的广谱抗菌药如庆大霉素、青霉素、链霉素和磺胺类药物等，由于产生了耐药性等原因，可能疗效不十分明显。现在常用一些沙星类药物及其衍生物，如泰妙菌素、强力霉素、红霉素、泰乐菌素等进行治疗。为了解其抗菌性，为临床使用提供依据，对此药物进行了体外药敏试验研究，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 药品与试剂。泰妙菌素由诺华公司提供，含量100%；药敏试验前配成128 μg/mL的溶液。所用试剂为分析纯或进口产品。
1.1.2 培养基。普通肉汤、MH培养基由杭州微生物试剂有限公司生产，Brain Heart Infusion（Oxoid产品），鸡毒支原体培养基采用中国兽药监察所配方。
1.1.3 菌种及菌液制备。金黄色葡萄球菌26003，由浙江省兽药监察所保存；类马链球菌C55931、大肠杆菌K₈₈ 902购自中国兽药监察所，由浙江大学动物科学院预防兽医学研究所保存。金黄色葡萄球菌及大肠杆菌分别在普通琼脂培养基上划线培养，取典型菌落接种于5 mL普通肉汤中37℃培养12 h，试验前用灭菌普通肉汤稀释菌液至10⁶ cfu/mL；类马链球菌在新鲜血琼脂培养基上划线培养，取典型菌落接种于5 mL Brain Heart Infusion中37℃培养12 h，试验前用灭菌Brain Heart Infusion稀释菌液至10⁶ cfu/mL；鸡毒支原体NB72株，由中国兽药监察所提供。取保存株接种于5 mL的液体培养基中，37℃培养3 d至颜色变黄，作为第1次传代，同样方法传至第3代，测定其颜色变化单位（ccu），-20℃冰箱保存。
1.2 最小抑菌浓度（MIC）的测定方法
采用oCelloScope微生物快速药敏监测系统进行MIC测定。
1.2.1 鸡毒支原体（鸡败血霉形体）。取无菌带胶塞试管16支，将菌液用液体培养基稀释为10⁴ cfu/mL，第1管中加入1.8 mL，其余各管加1.0 mL。将药液（128 μg/mL）0.2 mL加入第1管充分混合后，取1.0 mL加入第2管，依此类推，直至第14管。塞紧胶塞，置于37℃培养。使用oCelloScope系统实时监测各管中微生物的生长情况，通过连续成像和分析自动判定终点。每次试验重复3次，每次设2种对照：①培养物对照，接种同数量的菌液，不加抗菌药；②培养基对照，不接种菌液，不加抗菌药。系统自动记录达到生长抑制阈值时的浓度作为MIC，继续监测至生长完全停止时的浓度作为最小杀菌浓度（MBC）。重复3次，取平均值。
1.2.2 金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。分别取无菌带胶塞试管16支，将菌液用普通肉汤稀释为10⁴ cfu/mL，第1管中加入1.8 mL，其余各管加1.0 mL。将药液（128 μg/mL）0.2 mL加入第1管充分混合后，取1.0 mL加入第2管，依此类推，直至第14管。塞紧胶塞，37℃培养。使用oCelloScope系统实时监测并自动判定MIC。每次试验重复3次，每次设2种对照：①培养物对照，接种同数量的菌液，不加抗菌药；②培养基对照，不接种菌液，不加抗菌药。
1.2.3 类马链球菌。取无菌带胶塞试管16支，将菌液用Brain Heart Infusion稀释为10⁴ cfu/mL，第1管中加入1.8 mL，其余各管加1.0 mL。将药液（128 μg/mL）0.2 mL加入第1管充分混合后，取1.0 mL加入第2管，依此类推，直至第14管。塞紧胶塞，37℃培养。使用oCelloScope系统实时监测并自动判定MIC。每次试验重复3次，每次设2种对照：①培养物对照，接种同数量的菌液，不加抗菌药；②培养基对照，不接种菌液，不加抗菌药。
2 结果与分析
试验检测结果表明，泰妙菌素对鸡毒支原体的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为0.00313、0.00625 μg/mL；金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和类马链球菌的最小抑菌浓度分别为0.2、6.4、0.2 μg/mL。
3 结论与讨论
结合该试验各项检测结果可以看出，泰妙菌素在试管中对鸡毒支原体、金黄色葡萄球菌、类马链球菌均有良好的抑菌作用，尤其对鸡毒支原体效果显著；而对大肠杆菌的抑菌作用则不强。泰妙菌素的抗菌谱与大环内酯类相似，对革兰氏阳性菌（如金葡菌、链球菌）、支原体（鸡败血支原体、猪肺炎支原体）、猪胸膜肺炎放线杆菌及猪密螺旋体等有较强的抗菌作用。有报道表明，泰妙菌素在治疗畜禽呼吸道病时，与其他抗生素合用可拓宽抑菌谱，效果良好。在预防和治疗痢疾方面也有很好效果，且无药物残留，不污染环境，对传染性疾病的治疗效果极好。
支原体是一类缺乏细胞壁的原核微生物，培养时营养要求高，需在特殊培养基中培养，在液体培养基中生长后不浑浊或很少浑浊，生长缓慢，往往需要培养3～10 d才能生长。因此，在操作过程中要求严格执行无菌操作，避免杂菌和霉菌的生长。
本试验采用的oCelloScope微生物快速药敏监测系统，相比传统的浓度系列稀释法，具有自动化、实时监测、减少人为误差等优势。该系统通过连续成像分析微生物生长动态，能够更精准地确定MIC和MBC，尤其适用于生长缓慢的支原体等微生物的药敏试验。
不同研究者测得的抗菌药对MG的MIC值存在差异，引起差异的原因较多，包括试验方法、培养基成分和pH值、接种物浓度、培养条件、观察结果的时间及判定标准等，而菌株不同可能是引起MIC差异的最主要因素。
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