高产纤维素酶枯草芽胞杆菌生长曲线、产蛋白酶及α-淀粉酶能力及药物敏感性研究（二）
1.5 蛋白酶、α-淀粉酶活力的测定
采用王梦超等12的福林酚法测定蛋白酶活力，酶活定义：1 mL粗酶液，在40℃，每分钟水解酪蛋白产生1 μg酪氨酸的含量为1个酶活单位。
采用DNS法10测定α-淀粉酶活力。酶活定义：1 mL液体酶，在50℃，每分钟水解淀粉产生1 μg葡萄糖的还原糖量为1个酶活单位。
1.6 抑菌活性及耐酸性、耐胆盐性测定
采用琼脂扩散法进行体外抑菌试验。取80 μL浓度1×10⁷ CFU/mL的大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌涂布于LB固体培养基上，待完全吸收后，取灭菌的牛津杯轻置于培养基上。取200 μL目标菌株的菌液加入牛津杯中。用PBS作为对照。4℃扩散12 h后37℃培养16 h，测量抑菌圈直径，取平均值。判断标准：≤5 mm，不敏感；＞5～10 mm，低度敏感；＞10～15 mm，中度敏感；＞15～20 mm，高度敏感；＞20 mm，极度敏感。测定目标菌株在pH值2.0、3.0、4.0和7.0条件下处理4 h后的存活率。复检0、0.1%、0.2%和0.3%胆盐处理8 h后目标菌株的耐受性。
1.7 安全评估
采用纸片扩散试验检测目标菌株对青霉素、头孢唑啉、庆大霉素、克拉霉素、林可霉素、诺氟沙星、万古霉素、利福平的敏感性。测定抑菌区，并对被测菌株进行药敏评价。
将32只26～28 g的健康雌性昆明小鼠均分为低剂量、中剂量、高剂量和对照4组，分别灌胃0.2 mL浓度为10⁸、10⁹、10¹⁰ CFU/mL的目标菌株培养液，对照组灌胃无菌LB液体培养基，记录小鼠采食和体重情况，连续灌胃14 d后处死小鼠，剖检观察脏器。
1.8 数据统计与分析
利用SPSS 26.0软件对试验数据进行单因素方差分析，结果用“平均值±标准差”表示，以P＜0.05表示差异显著。
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