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​悬浮培养细胞生长曲线的绘制

来源: 发布时间:2024-02-21 05:52:07 浏览:28 次

悬浮培养细胞生长曲线的绘制


以三种不同细胞浓度进行系列细胞培养,每天计数细胞直至平台期。

无菌


悬浮细胞培养


培养液,l00 ml


D-PBSA(细胞计数用)


24孔板


非无菌


装培养板的塑料盒


CO2温箱或5%C02以充盈塑料盒


悬浮细胞的传代培养:


1.直接传代法:


1)打开培养皿(瓶)盖(盖放在“非工作区”,盖、培养皿口不能接触任何物品);


2)按照传代比例加入适当体积的新鲜的完全培养基,小心吹打成细胞悬液,再按照传代比例,等分装入新的培养皿(瓶)中;


3)盖好盖子,混匀,放入37℃,5%CO2培养箱中培养。


2.离心传代法:


1)打开培养皿(瓶)盖(盖放在“非工作区”,盖、培养皿口不能接触任何物品);


2)将细胞悬液用移液枪或巴氏吸管吸至新的15mL离心管中;


3)1500rpm离心3min,弃上清,加入适当体积的新鲜的完全培养液,用吸管轻轻吹打成细胞悬液,按比例进行传代,将细胞悬液分配至新的培养瓶(皿)中,补足完全培养液;


4)盖上盖子,混匀,放入37℃,5%CO2培养箱中培养;


3.收培养基、胰酶等,75%酒精擦拭操作台面,关闭生物安全柜;


4.冲洗废液缸。


操作步骤


1.如单层培养那样(见方案21.8)将生长液中的细胞悬液以不同浓度加人到孔中。


2.以不同时间从三孔中取样0.4 ml,注意细胞要充满混匀以及完全分散成单个。


3.用电子细胞计数器汁数(见21.1.2节)或用血球计数器计数(见21.1.1节)。


4.计算每个样本的细胞浓度,像单层细胞生长一样以时间作对数线性作图(见21.9.3节)。细胞密度不适用于悬浮培养,因为它们不会贴附。


提示接种2个75 cm2培养瓶,每瓶20 ml不同农度的细胞悬液。按需要每天从瓶中取0.4 ml,但取样前要混匀细胞。培养瓶离开温箱的时间要尽量短,在画生长曲线期间不要换培养液。或者将培养瓶装在振荡器上(Techne,Integra,BeHco),每天取样。如果用振荡培养瓶在一侧瓶口封膜,则不用从温室中取出培养瓶,也不用打开封口膜就可以取样,将膜面擦净,颠倒一下瓶子用注射器就可将液体吸出。


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