靶向妇科炎症：两株阴道乳杆菌的筛选、抑菌机制与益生潜力分析
摘要【目的】为开发针对妇科炎症的微生态制剂，本研究对健康妇女阴道的乳酸菌进行分离并对其抑菌特性进行探究。
【方法】采用平板划线、形态学鉴定和16S rRNA基因鉴定相结合的方法，对阴道中的乳杆菌进行分离纯化和鉴定。对分离得到的5株乳杆菌进行生长特性和黏附能力的测定。利用牛津杯法，以大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC 25923和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC 8739为指示菌，测定乳杆菌的抑菌能力；利用微量孔板法测定乳杆菌对白假丝酵母(Candida albicans)CMCC(F)98001的抑制能力。用有机酸排除和过氧化氢排除法对其抑菌成分进行探究。
【结果】初步分离出5株乳杆菌，其中Q2.1、BHC04和Q8.5为卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)，Q6.3和BHG05为格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)。5株乳杆菌均具有较强的生长和产酸能力，其中Q2.1、BHC04和BHG05的延滞期短，在20 h可达到稳定生长期，BHG05、Q6.3和Q8.5的产酸能力较强，最终pH可达3.80−4.03。卷曲乳杆菌Q2.1、BHC04和Q8.5的黏附能力(疏水能力、自凝集率、与致病菌的共凝集率)显著高于阳性对照菌株德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)DM8909。5株乳杆菌对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白假丝酵母的抑制能力显著高于阳性对照乳酸链球菌素(nisin)。BHC04、BHG05和Q8.5对大肠杆菌的抑制能力显著高于阳性对照菌株DM8909。BHG05对白假丝酵母的抑制能力显著高于阳性菌株DM8909，可达(73.14±0.14)%。BHC04和Q8.5对白假丝酵母的抑制能力与DM8909无显著性差异，可达(72.80±0.30)%和(72.93±0.10)%。综上，选取BHC04和BHG05作为具有抑菌潜力的优质菌株。5株乳酸菌可以产生有机酸、过氧化氢等发挥抑菌作用。
【结论】筛选出2株具有抑菌能力且益生特性优良的乳杆菌，可作为抑菌微生态制剂的候选菌株来治疗和预防由大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白假丝酵母引起的妇科疾病。
引言
健康妇女阴道是一个非常复杂的微生态系统，包含细菌、真菌等各种微生物，它们主要定殖于阴道四周的侧壁黏膜中。这些微生物之间互相制约、互相作用，形成阴道微生态系统。正常情况下微生态处于一个波动的状态，微生物的种类和数量都不会发生质的变化。当这个系统平衡被破坏时，会出现由于阴道菌群失调引起的阴道炎、宫颈炎和盆腔炎等多种疾病。阴道感染性疾病在国内具有高发态势，严重影响患者的身体健康与生活质量。
念珠菌性阴道炎(vulvovaginal candidiasis,VVC)是一种具有高发病率、高复发性以及非致命性等特点的妇科疾病，是困扰全球女性身体健康的一大难题。念珠菌性阴道炎的主要致病菌为白假丝酵母，这是一种存在于健康女性阴道内的机会致病菌，其菌丝态可以通过分泌黏附素定殖在阴道上皮细胞，进而形成生物膜，来抵抗抗真菌药物和宿主防御。需氧性阴道炎(aerobic vaginitis,AV)是以阴道内乳杆菌减少或缺失、需氧菌增多为主要特征的阴道感染性疾病，最常见的病原体是大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等。当前阴道炎的治疗方法主要是使用抗生素治疗，虽然抗生素对疾病的控制具有积极的作用，但是研究表明，在使用抗生素治疗阴道细菌感染患者12个月后有50%的复发率。
标准的抗生素疗法忽视了已经失调的阴道环境，无法重建阴道酸性环境，同时，抗生素也不适用于孕妇和哺乳期妇女。这些副作用给抗生素治疗带来了新的挑战。乳杆菌为阴道菌群的优势微生物，数量可达阴道菌群的95%以上，在维持阴道微生态环境平衡发挥重要作用。育龄女性正常阴道菌群主要以卷曲乳杆菌和惰性乳杆菌为主，卷曲乳杆菌可以作为反映女性正常阴道微生态的标志，惰性乳杆菌与阴道微生态紊乱密切相关。
研究发现，当阴道菌群失衡时，及时补充乳杆菌可以纠正阴道微生态的平衡，对疾病的治疗具有积极的意义。目前在阴道炎治疗上，不仅要改善症状提高治愈率，而且还要调整微生态失衡状态，其中恢复乳杆菌数量来提升阴道防御功能成为关键。本研究致力于从阴道样品中筛选出对常见阴道炎病原菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白假丝酵母)有较强抑菌作用的优质乳杆菌，为开发预防和缓解由菌群紊乱而引起的阴道炎的微生态制剂提供潜在的优良菌株。
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