阿美替尼对结肠癌SW620、HT29细胞增殖、侵袭迁移和凋亡的作用及机制
摘要
目的 探究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors，EGFR-TKI）阿美替尼对结肠癌SW620、HT29细胞增殖、侵袭迁移和凋亡的作用及机制。
方法 体外培养结肠癌SW620、HT29细胞，CCK-8法、流式细胞术、Transwell实验检测阿美替尼对SW620、HT29细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响；Western blot实验检测凋亡和侵袭迁移相关蛋白Bax、Bcl-2、E-Cadherin、Vimentin的表达。将SW620细胞注射到5周龄BALB/c裸鼠右前肢皮下，建立裸鼠皮下瘤动物模型，测量皮下瘤体积，记录裸鼠体重、生存曲线，苏木精-伊红（HE）染色观察阿美替尼对心、肝、脾、肺、肾有无损伤作用。
结果 CCK-8实验表明阿美替尼抑制SW620、HT29细胞增殖；流式细胞术结果表明阿美替尼诱导SW620、HT29细胞发生凋亡；Transwell实验结果表明阿美替尼抑制SW620、HT29细胞侵袭迁移能力；Western blot实验结果表明阿美替尼处理组SW620和HT29细胞中E-Cadherin、Bax蛋白上调，Bcl-2、Vimentin蛋白下调。体内实验结果表明阿美替尼可以对结肠癌细胞皮下移植瘤产生抑制作用，延缓裸鼠体重的减轻，延长荷瘤裸鼠生存时间，HE染色结果表明阿美替尼没有明显的器官毒性。
结论 阿美替尼能够抑制结肠癌SW620、HT29细胞的增殖、侵袭迁移并诱导SW620、HT29细胞凋亡。
引言
结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，发病率和死亡率逐年升高，最新癌症统计报告显示，结肠癌的发病率升至第3位，死亡率在第2位。目前，结肠癌的治疗手段以手术切除为主，但其复发率较高。化疗是结肠癌常见的联合治疗手段，手术联合化疗可显著抑制结肠癌的发生发展，但由于化疗药物缺乏靶向性，因此常伴有严重的毒副反应，且长期用药后容易产生耐药，导致化疗联合治疗效果不佳。分子靶向治疗是针对恶性肿瘤细胞关键调控分子而设计的一种治疗方式，相较于传统的化疗药物，靶向药物可以结合特异性靶点，使肿瘤细胞死亡，但不会对周围正常细胞产生影响，因此近年来越来越受到临床医生的重视。
表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）是一种跨膜糖蛋白，与表皮生长因子结合能够启动核内相关基因表达，促进细胞增殖，在肿瘤发生发展过程中扮演着重要的角色。表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）能够阻断EGFR与其配体结合，抑制肿瘤细胞的生长。研究表明，EGFR-TKI可对多种癌症发挥抗肿瘤作用，如肺癌、乳腺癌、结肠癌。阿美替尼（Almonertinib）是具有自主知识产权的小分子EGFR-TKI，可靶向EGFR而发挥抗肿瘤作用。临床前研究表明阿美替尼对肺癌有较好的治疗效果，但对于结肠癌细胞的作用尚未见相关文献报道。本研究以SW620和HT29细胞作为研究对象，旨在探索阿美替尼对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移以及对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响，探讨其可能的作用机制，为结肠癌的临床治疗方案提供更多选择，为阿美替尼应用于临床治疗结肠癌提供理论和实验依据。
1 材料与方法
1.1 主要实验材料
细胞株：结肠癌SW620细胞、结肠癌HT29细胞购自武汉普诺赛生命科技有限公司。实验动物：SPF级BALB/c裸鼠购自常州卡文斯实验动物有限公司，许可证号：SCXK（苏）2016-0010。试剂：阿美替尼（江苏豪森药业有限公司）、E-cadherin抗体（Proteintech，批号：20874-1-AP）、Vimentin抗体（Proteintech，批号：10366-1-AP）、Bax抗体（Proteintech，批号：50599-2-Ig）、Bcl-2抗体（Proteintech，批号：12789-1-AP）、β-actin抗体（Proteintech，批号：20536-1-AP）、DMEM培养液（Gibco，批号：8121130）、McCoy5A培养液（上海中乔新舟生物科技有限公司，批号：ZQ-1000）、胎牛血清（ExCell Bio，批号：FSP500）、CCK-8试剂（APE BIO，批号：K101816133EF5E）、胰酶消化液（Biosharp，批号：BL501A）、青霉素-链霉素溶液（Biosharp，批号：BL505A）、RIPA裂解液（碧云天生物，批号：P0013C）、Annexin V-FITC/PI试剂盒（贝博生物，批号：BB21051）、Transwell小室（Corning公司，批号：3422）、BCA蛋白浓度测定试剂盒（Biosharp，批号：BL521A）。
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